重組dna分子匯入受體細胞的主要方法有哪些

時間 2021-08-30 09:29:17

1樓:墨汁諾

(1)農桿菌轉化法:

農桿菌是土壤中的一種微生物,在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物,對大多數單子葉植物沒有感染能力。農桿菌進入植物細胞後,其ti質粒上的t-dna會轉移到受體細胞染色體的dna上,目的基因進入植物細胞。

(2)花粉管通道法:

在授粉後向子房注射含目的基因的dna溶液,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源dna匯入受精卵細胞,並進一步地被整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發育而成為帶轉基因的新個體。

(3)基因槍法:

基因槍根據動力系統可分為火藥引爆、高壓放電和壓縮氣體驅動三類。其基本原理是通過動力系統將帶有基因的金屬顆粒(金粒或鎢粒),將dna吸附在表面,以一定的速度射進植物細胞,由於小顆粒穿透力強,故不需除去細胞壁和細胞膜而進入基因組,從而實現穩定轉化的目的。

原理:

選擇一種特製的空質粒載體(如pbi121質粒載體),其上要求含有t-dna邊界序列(此處可參見詞條雙元表達載體系統),在序列之間含有複製原點、抗性基因、gus報告基因、hind ⅲ和bamh i 等酶切位點(以上這些構成了一個t-dna區)。

先通過雙酶切反應酶切空質粒載體和目的基因,再通過酶連反應連線空質粒載體和目的基因,從而構建成完整的重組質粒。此時重組質粒的t-dna區包括t-dna邊界序列、複製原點、突變啟動子片段、gus報告基因、抗性基因。

2樓:匿名使用者

主要方法:

匯入植物受體細胞:

(1)農桿菌轉化法。

農桿菌是土壤中的一種微生物,在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物,對大多數單子葉植物沒有感染能力.農桿菌進入植物細胞後,其ti質粒上的t-dna會轉移到受體細胞染色體的dna上,是目的基因進入植物細胞。

(2)花粉管通道法:

在授粉後向子房注射含目的基因的dna溶液,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源dna匯入受精卵細胞,並進一步地被整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發育而成為帶轉基因的新個體。該方法於80年代初期由我國學者周光宇提出,我國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的最大優點是不依賴組織培養人工再生植株,技術簡單,不需要裝備精良的實驗室,常規育種工作者易於掌握。

(3)基因槍法:

該法又稱粒子轟擊(particle bombardment),高速粒子噴射技術(high-velocity particle microprojection)或基因槍轟擊技術(gene gun bombardment),是由美國cornell大學生物化學系john.c.sanford等於2023年研究成功。

主要適用於單子葉植物。但轉化效率較低。

基因槍根據動力系統可分為火藥引爆、高壓放電和壓縮氣體驅動三類。其基本原理是通過動力系統將帶有基因的金屬顆粒(金粒或鎢粒),將dna吸附在表面,以一定的速度射進植物細胞,由於小顆粒穿透力強,故不需除去細胞壁和細胞膜而進入基因組,從而實現穩定轉化的目的。

匯入動物受體細胞:

顯微注射法:顯微注射法(microinjection)是利用管尖極細(0.1至0.

5μm)的玻璃微量注射針,將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養的細胞中,然後藉由宿主基因組序列可能發生的重組(rearrangement)、缺失(deletion)、複製(duplication)或易位(translocation)等現象而使外源基因嵌入宿主的染色體內。

匯入微生物受體細胞

感受態法:先用ca離子處理細胞,使細胞處於一種能吸收周圍環境dna分子的生理狀態,這種細胞為感受態細胞,後將重組表達載體dna分子溶於緩衝液中,在一定溫度下促使感受態細胞吸收dna分子

3樓:匿名使用者

進行轉化。構建好的載體,進行基因槍轟擊、農桿菌介導等方法,進入到植物或動物細胞中。

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