1樓：大俠劍指天
雙酶切，然後做ligase連線就好。連線的過程中會出現很多突變。
然後你把連線的產物做轉化。如果有條件可以使用電激轉化，這個轉化的效率非常點（連線產物本來就不多，突變又多）。如果條件不夠就用熱激轉化，熱激轉化的效率低一些，不如電激轉化好。
千萬不要用tss轉化（效率太低了，只能用成型的質粒）。
轉化之後你要挑選菌落，去做測序（一般交給公司），因為突變很多，一定要測序到完全正確的序列。如果沒有測到，就繼續挑選菌落。如果菌落挑完了，就重新轉化。
這段時間要多扶老太太過馬路哦。
等到你得到了好的菌落，就可以培養它，提取質粒。這個量就很大了。
給你個簡單的protocol
pcr 你的基因
對pcr產物，和空質粒，同時使用雙酶切（分開的），加入合適的nebuffer
使用t4ligase 和buffer 常溫1小時或者16度過夜 連線。
熱激轉化（電激轉化還有clean脫鹽）
挑去菌落
提取dna 測序（（（得到了你要的哦）））
選定菌落，液氮儲存
2樓：葉綠蛋白
能。實際上大家正是這麼做的。
將一個目的基因連線到質粒上，一般用兩種dna內切酶做雙酶切，使目的基因和被切開的質粒片段兩端都有特異性的粘性末端，然後用dna連線酶把目的基因與質粒片段連起來。
然後將重組質粒轉化進感受態的細菌細胞中去（一般用熱激法）。
由於選用的質粒上一般帶有某種抗生素抗性基因（最常見的是抗氨苄青黴素抗性基因）。因此轉化後的細菌沒有吸收上質粒的都不能在加有相應抗生素的平板上生存。
然後在平板上挑選幾個單克隆菌落進行擴增培養，質粒（以及其上的重組基因）會隨著細菌的擴增而擴增。
用擴增好的菌液來抽提質粒就得到比原先多得多的目的基因拷貝數。如果用的是合適的菌種，那些菌液還可以用來誘導表達相應的蛋白質（假設這是編碼原核生物蛋白的基因或者是用cdna整出來的而且能在原核生物正常表達的基因）。
如果擴增出來的質粒沒有重組基因怎麼辦？對抽提出來的質粒進行dna測序就知道有沒有重組基因在裡面了。有時候序列會有突變，這跟選用的菌株有關，比如說jm109菌株比起dh5α菌株就較不容易讓質粒序列產生突變。
一般人運氣不會差到5個單克隆菌落裡面都沒有一個有的，除非是酶切技術有問題。
我想成立一個網路工作室，請各位高人給我起個好聽霸氣的名字。 40
3樓：匿名使用者
巨集晟科技工作室，希望可以幫助到你望採納噢謝謝。
我想做一個婚禮**的工作室，想用r和f倆個英文字母做英文名稱，麻煩各位高人給起個英文或者中文的名字
4樓：匿名使用者
royal feeling 尊貴感覺
rainbow family 彩虹之家
real fairy-tale 真實的童話remeber forever
希望對你有幫助
5樓：雨季的夏末
love forever 相愛永遠
6樓：匿名使用者
rose factory 玫瑰工坊
7樓：匿名使用者
red forever
8樓：掛在樹上的月亮
romantic forever
各位大俠，我想問問題，npn型三極體vbe之間可以加0 6 0 8v的電壓嘛嘛！那vce之間最
董事長老豆 首先 聽說vbe之間所加的電壓最高不能超過1伏 這種說法不對。三極體b e之間是電流 即ib 的關係而不是電壓的關係,vbe 或者veb 是由三極體的pn結鎖定,如下圖 圖 a 中兩個電阻的分壓點是7v,如果用這個分壓電路作為圖 b 的偏置電路時,那麼其分壓點的7.5v就直接加在q的b極...
我想問問題，希望大家不要笑話我，喜歡女孩，她家庭條件比我好很多，我現在一無所有，想要追到她
把回憶留給明天 這是好事，你有追求的目標，甭管社會現實不現實的問題，就怕你明知道自己一無所有還不努力，如果你努力了不一定能追到，但不努力絕對沒戲 謊言灬 為什麼要笑話你呢，你有權利喜歡一個人追求她，就因為她家裡條件比你好你就不敢了嗎？如果她對你也有感覺的話那就追啊，用你的真心打動她不難的 聊戎 很難...
想問問題，比較幼稚，希望你別笑話我。我想問一下你學習的動力是什麼，我可以說一直沒徹底想明白這
那我覺得你已經沒動力去學習了。雖然你覺得 我一定要保持著熱情，不然我學習就會落後了。可是你控制不了你的思想的嘛 你的想法已經比較懶散或者不想堅持了。一般我遇到這種情況，我就會由得自己的想法繼續這樣下去。就好比說，這個月花太多錢了，下個月要省點。但其實我不會省的。想花時就花，越規定自己反而越有叛逆心理...