反相高效液相色譜的固定相是什麼,流動相有什麼什麼

時間 2021-08-15 06:48:24

1樓:禾鳥

反相高效液相色譜的固定相是非極性溶劑,常見的固定相是十八烷基鍵合矽膠,流動相是極性溶劑,常見的流動相是甲醇,乙腈。

反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系,它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。

rp-hplc的典型的固定相是十八烷基鍵合矽膠,典型的流動相是甲醇和乙腈。rp-hplc是當今液相色譜的最主要的分離模式,幾乎可用於所有能溶於極性或弱極性溶劑中的有機物的分離。 反相色譜法適於分離非極性、極性或離子型化合物,大部分的分析任務皆由反相色譜法完成。

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反相高效液相色譜的原理:

在反相鍵合相色譜法中使用的是非極性鍵合固定相。它是將全多孔(或薄殼)微粒矽膠載體,經酸活化處理後與含輕基鏈(c4、c8、c18)或苯基的矽烷化試劑反應,生成表面具有烷基或苯基的非極性固定相。如共價結合到載體上的直鏈碳氫化合物正辛基等。

關於反相色譜的分離機理,吸附色譜的作用機制認為溶質在固定相上的保留主要是疏水作用,在高效液相色譜中又被稱為疏溶劑作用。根據疏溶劑理論,當溶質分子進入極性流動相後,即佔據流動相中相應的空間,而排擠一部分溶劑分子。

當溶質分子被流動相推動與固定相接觸時,溶質分子的非極性部分或非極性因子會將非極性固定相上附著的溶劑膜排擠開,而直接與非極性固定相上的烷基官能團相結合(吸附)形成締合絡合物,構成單分子吸附層。

這種疏溶劑的吸附作用是可逆的,當流動相極性減少時,這種疏溶劑斥力下降,會發生解締,並將溶質分子解放而被洗脫下來。

2樓:聲沛文

反相即指流動相極性比固定相大的液相色譜法

同一根柱子,可能是正相,也可能是反相,例如安捷倫 zorbax cn柱,用正己烷-異丙醇作流動相就是正相hplc,用水-甲醇/乙腈就是反相hplc

固定相一般是非極性的,如十八矽烷c18

3樓:匿名使用者

反相即指流動相極性比固定相大的液相色譜法

反相中最常用的是c18柱,最常用的流動相是乙腈,甲醇和水,可以新增一些其他東西,如磷酸鹽,酸或胺類,也可以加活性劑等,看分析需要

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