siRNA轉染實驗，如何選擇siRNA轉染試劑

1樓：匿名使用者

1.設計合成有效的sirna

rnai的核心需要sirna對相應mrna進行有效的結合和作用。sirna的設計合成首先很重要，最優的設計可以用最小的工作濃度取得滿意的沉

默效果，減少副反應的發生。sirna的設計可以通過檢索,優先選用經過驗證的sirna或設計多對sirna。需要強調的是，需要同時設定陰性對照以排

除非特異沉默現象和陽性對照以確認整個實驗體系的有效性。

2.合成的sirna注意純度和工作濃度

sirna的合成需要注意的是一定要選用高純度的sirna，sirna的純度直接關係到轉染效率和沉默效率。sirna的工作濃度和sirna的設計、細胞種類、目標基因有關。建議一定進行相關的預實驗優化各條件。

3.選擇合適的sirna轉染試劑

選擇合適的sirna轉染試劑是的rnai實驗成功另一個關鍵。由於細胞毒性對sirna實

驗的影響非常大，可以直接影響實驗結論和結果，所以一定選擇低毒性的轉染試劑，看一個轉染試劑毒性是否低，有一個簡單的方法，看轉染的過程和要求，比如要

求的細胞密度越大，說明毒性越大，比如轉染複合物容許和細胞孵育的時間越短，說明毒性越大。除了低毒性，還最好操作簡便，越簡單越好，比如有的轉染試劑要

求轉染前換無血清培養基或低血清培養基，轉染後又要有血清培養基，實際上，由於培養條件的頻繁變化，可能會對細胞表達模式產生影響，對後續的mrna和蛋

白分析也同樣產生影響，最終影響實驗的可靠性。

2樓：匿名使用者

通常是建議用來稀釋sirna和稀釋轉染試劑的培養基是無血清培養基。但我們課題組用的biodai轉染前後不需要換成無血清培養基。遇到特別的，可以在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養基，以防轉染後孵育階段細胞密度太大、營養不足導致的細胞死亡。

如何選擇sirna轉染試劑

3樓：淵源

多查多問多試驗

市面上的轉染試劑品種很多，商家們還在不斷推出新產品，如此多的選擇難免令人感到無所適從，怎樣才能找到最適合自己的產品呢？轉染試劑的選擇主要取決於細胞型別、細胞種屬和下游實驗。

細胞系不同，它們所需的轉染條件自然也不相同。舉例來說，懸浮培養的鼠類原代細胞，就比貼壁培養的人類細胞更難轉染。此外，神經元和巨噬細胞也令人頗為頭疼，標準方法很難將sirna轉染進去。

不論是哪種情況，經驗資料都具有無可取代的價值。查閱文獻，與其他研究者多交流都能獲得寶貴的資訊。當然，我們也可以在**商提供的資料中，檢視已成功轉染的細胞型別。

儘管這些資料中可能並沒有sirna轉染的專門資訊，但瞭解轉染試劑已經成功轉染了哪些細胞，是很有幫助的。

此外，我們可以向商家索要一點樣品，或者向同事借用一些，對自己的細胞進行試驗。幸運的話，在幾天內就可以鎖定合意的產品。在這裡花少許時間，總好過因為實驗結果不理想而要重頭再來吧。

4樓：匿名使用者

現在做轉染試劑的公司很多。我們實驗室之前用過一款rfect小核酸轉染試劑，轉染陽性率高，細胞死的也很少，做下來實驗挺成功的。