1樓:相遇下一世
◆乾粉引物溶解稀釋方法:
收到引物後,在開啟離心管蓋前在3000-4000轉/分鐘的轉速下離心1分鐘,以防開蓋時引物乾粉散失。引物儲存在高濃度的狀況下比較穩定。如果對實驗的重複性要求較高,合成的od數較大,建議分裝,避免反覆凍融。
引物一般配製成10-100pmol/ul(umol/l)。
引物管上標有1od 相當於多少umol 的計算結果,進行稀釋時的引物加水量可以按以下公式計算:
稀釋成100pmol/ul 1od 需加水量(ul)=1od相當於umol 數×10000
例如,您拿到的引物dna合成報告單上標有1od≈ ,包裝量是1od/管,如果您希望將引物濃度定為10umol/l,那麼只需用350ul無核酸酶的雙蒸水將1od的引物乾粉溶解即可。
◆液體引物再稀釋可用下列公式:
稀釋引物要達到的濃度(pmol/ul)=母液濃度(pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷(汲取母液的體積(ul)+加水量(ul))
引物一般來的時候是乾粉。這種狀態能儲存最長的時間。
如果用的話要先離心,5分鐘(12000轉)。然後用它上面寫的nmol*1000/你的終濃度=你要加的水量。
溶解液有te和dd水。te其實就是tris鹽酸和edta的混合液。理論上用te儲存好,不容易降解。
一般配的時候要先配成儲存液(濃度是100umol/l),在配成使用液(濃度是10umol/l)。這樣的好處是引物不容易降解。
引物忌諱反覆凍溶,大家要注意。如果你都配成了使用液就應該分裝。使用液放在4度(2/3個月沒問題的),儲存液放在-20度。
引物稀釋很簡單,一般裝引物的管子上都標有引物的量如, 可直接往管中加360ul的無菌雙蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速離心管子幾分鐘,加水後要高速漩渦混勻幾分鐘就可以用了,此時的儲存濃度是10umol/l,如果體系是20ul一般加1ul引物(引物的使用濃度最大為10pmol/ul,但一般在即可 )。
引物的濃度設定,不同的人有不同習慣,有的喜歡稀釋成100um的,有的習慣於稀釋成20um,也有的稀釋成10um的。建議稀釋成20um的濃度,因為如果你稀釋成100um,當你所做pcr的體系不是很大的時候,體積太小了引物就不好加,容易產生誤差;如果是稀釋成10um,引物濃度過低,容易降解。不過不管你稀釋成多大濃度的,最好分裝儲存,免得反覆凍融容易降解。
溶解引物需要什麼水
2樓:匿名使用者
先離心!然後加入適量的水或te溶解。一般配製成較高濃度的母液(約100μm),儲存於-20℃。
使用前取出其中一部分用ddh2o配製成10μm或20μm的工作液。引物濃度不宜偏高,濃度過高有兩個弊端:一是容易形成引物二聚體(primer-dimer),二是當擴增微量靶序列並且起始材料又比較粗時,容易產生非特異性產物。
一般說來,用低濃度引物不僅經濟,而且反應特異性也較好。一般終濃度用。
5pm/μl較好。
1 引物的分子量如何計算? 比如:aagcttttaccgc的分子量是多少?
2 od值,1個od值是不是等於40ug。
3 質量數,質量數的含義是什麼,怎麼計算?
4摩爾數(μmol)和終濃度(pm)和稀釋水量(μl)
是不是計算稀釋引物都要用到以上四點的各個引數?具體的公式是什麼呢?
合成引物的單子上應該有演算法:
1od=33ug
1個鹼基的分子量=
(以上為近似值,通常都這樣用)
1條引物的分子量=鹼基數*
質量數=od*33ug
摩爾數=質量數/分子量。
先離心的原因是什麼?
因為引物合成後是乾粉狀的,在運輸過程中可能會沾到管壁或管蓋上,直接開啟有些粉末可能會飄出去,引物的量就減少了。先離心使粉末都到管底,可以避免這種現象的發生。
然後根據以下公式可計算出所加雙蒸水的量。
33nmol/od×管上所標od值×100
是為10pmol/ul濃度的引物溶液,還可以由此推算其它濃度所需的雙蒸水量。
可於-20度儲存。
訂引物回來的說明書背面一般都有引物稀釋計算的說明的。
注意分裝!
如何溶解引物
3樓:為青生物
根據引物的濃度,一般加300-600ul水,稀釋成10pmol/ul的工作濃度。
引物是怎麼合成的?
4樓:匿名使用者
自己把引物序列設計好,(郵件)填表把它傳送到上海生工公司,他們會引物合成好,裝在ep管裡寄給你啊。
5樓:
首先是測定引物的od值,然而將引物溶解,最後合成引物。目前,引物合成最重用的方法是固相亞磷醯胺三酯法,引物它具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。
6樓:秒懂**
引物:一種具有特定核苷酸序列的大分子。
invitrogen合成的引物 怎樣加水溶解
7樓:諾辰歸
看你自己設計時候的選項。如果選的是髮夾結構,雖然是單鏈,但是自己會形成髮夾雙鏈結構,如果是很短的(20bp),則是單鏈。
如何稀釋新引物啊
8樓:匿名使用者
用te(或ddh2o)稀釋,按引物合成報告單上寫的先稀釋到100um(一般有to dissolved into 100um,add xx ul water...不過注意一下是1od的還是一管的,一般指1od加這麼多),作為貯存液。
然後再取出一部分,稀釋10倍到10um,使用。
9樓:匿名使用者
你在哪個公司合成的引物?引物合成報告單上會寫的很明白,加多少水稀釋到100μm或10μm。仔細看看。
10樓:匿名使用者
管壁上一般還有mol數,你去根據這換算吧。
11樓:糟油酒丸
33ug在多少體積裡面?算出母液濃度以後再稀釋。
èçºîèü½âòýî
引物合成時nmol為1,od為0.2,怎麼稀釋
乾粉狀態的引物,根據什麼,怎麼稀釋成溶液儲存?
12樓:糟油酒丸
樓主說的是pcr引物麼?一般生產商會提供te緩衝液,用那個溶解為高濃度母液分裝(我們實驗室用的母液是100um),凍存在-30度,使用前再用雙蒸水稀釋一次到使用濃度,這個使用中溶液也是儲存在-30度的,但因為每次用都會化開的緣故,最後在幾周內用完,分裝時算好用量就好了。
13樓:浙大阿米巴
根據摩爾數稀釋稀釋成你所需的濃度。
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