1樓：匿名使用者
1. marker 的距離和大小不是線性關係，是指數關係。比如你有250、300、350、400、450、500這樣，250和300間的距離就比300-350的大，而300-350的距離又比350-400大，以此類推，越小的跑的越快。
另外，marker只是提供了相對大小，一般無法區分10幾個鹼基對的區別。
不過你理論上的293反而比258跑的還快，肯定有問題。
2. 為了更加準確的定位，你應該換用濃度更高的膠，比如4%。
3. 考慮到你幾個產物的大小和設計之間的矛盾，我建議你再檢查一下引物的位置和產物的理論大小，如果是rt-pcr，引物最好跨外顯子交界區，這樣擴增殘留基因組dna的機會就少很多。
2樓：匿名使用者
1.從圖中可以看出你而定marker選用的是dl2000，而你的產物理論值為275bp、258bp、293bp、380bp和283bp，而產物大小集中於250-500bp，這顯然不大合適，應該換一個500-1000bp以內的marker更好一些。
2.圖中左4理論為380bp，可實際電泳大小超過500bp，位於500-750bp之間，僅此一條你就需要重新核實一下你的引物了，而且275bp、258bp、293bp和283bp帶應該跟接近250bp的marker帶的位置。
rt-pcr的引物如何設計？
3樓：匿名使用者
引物可以通過一些軟體設計，比如primer 5 ，但是還需要注意一些細節問題。
比如1.引物最好在模板cdna的保守區內設計。 dna序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。
在ncbi上搜尋不同物種的同一基因，通過序列分析軟體（比如dnaman）比對（alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。
2.引物長度一般在15~30鹼基之間。 引物長度（primer length）常用的是18-27 bp，但不應大於38，因為過長會導致其延伸溫度大於74℃，不適於taq dna 聚合酶進行反應。
3.引物gc含量在40%~60%之間，tm值最好接近72℃。 gc含量（composition）過高或過低都不利於引發反應。
上下游引物的gc含量不能相差太大。另外，上下游引物的tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解鏈溫度，即在一定鹽濃度條件下，50%寡核苷酸雙鏈解鏈的溫度。有效啟動溫度，一般高於tm值5~10℃。
若按公式tm= 4（g+c）+2（a+t）估計引物的tm值，則有效引物的tm為55~80℃，其tm值最好接近72℃以使復性條件最佳。
4樓：匿名使用者
先找出你要擴增的「保守序列」的所有鹼基，到專門的設計軟體上搜尋最佳引物序列。
軟體和軟體的使用在丁香園上均可找到。
http://www.dxy.cn/bbs不過一開始最好有設計過的人在身邊指點，不然會有很多問題
5樓：匿名使用者
上面有很清楚
的設計方法。
6樓：許無憂
建議你去借分子克隆實驗指南來看看，或者採用引物設計軟體，比如primer premier 5，把序列輸入就可以得到不同打分的引物對
7樓：歸躍卜葉豐
microrna的莖環引物可以自己設計。據說有公司也可以幫忙合成，不過還是自己設計好了發過去比較省錢吧。內參一般是u6，因為它長度和microrna一樣比較短。
我做的反轉錄內參是跟microrna分開管子轉的real-time
quantification
ofmicrornas
bystem–loop
rt–pcr
這篇文獻上有比較容易看懂的莖環引物的圖。也可以看看幾篇相關的中文文獻都有。
rt-pcr和pcr引物設計為什麼會有不同
8樓：南京金益柏生物科技****
rt-pcr的核心還是pcr，模板是cdna，只不過這個cdna是rna反轉錄來的~~~ncbi上給的是cdna的序列
做rtpcr設計引物需查genebank，但是裡面哪些才是我需要的mrna的序列呢，請高手指點
9樓：
你找序列資訊裡，從cds標誌開始的那一段是編碼區。
查你那基因的mrna序列，找cds就可以了
10樓：
直接在ncbi的最上面的那個搜尋框裡面選擇gene,然後輸入你的基因名稱搜尋，然後找到你要那個基因（注意基因的種屬），然後點進去，在那個網頁的中間靠下面的地方有寫著mrna，你點進去就是mrna的序列啦
11樓：糟油酒丸
選擇ref_seq， 即 reference sequence，是經得起考驗的序列說。。。
請高手指教excel問題，請高手指教excel問題
在某格輸入 3 5 6 8 7，就顯示計算結果。要顯示公式，把這個格設定為 文字 格式 就不進行計算了 變數 在公式中用單元格代替就可以，比如 a1 b5 c18等，舉例 a1 b1。在a1和b1內輸入資料 變數 就會顯示乘積。引用某資料，比如資料在c15格，在d20中引用，就在d20中輸入 c15...
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記憶體1333的就可以了 1600你u不超頻的話這記憶體沒用 根本沒有效能提升 主機板換h67的 光碟機不要都可以啊 技嘉ga h67ma d2h b3 999 最便宜得了 除了光碟機跟電源以外，其他的都可以！電源可以選購航嘉的，現在做得比長城還要好 光碟機的話，華碩的光碟機現在做得不怎樣，比較容易...