1樓：匿名使用者
利用cacl2處理感受態體細胞，然後通過熱休克處理，即置於42℃高溫熱激90秒，熱休克後，需要使受體細胞在不含有抗生素的培養液中生長至少半小時以上，使其表達足夠的蛋白，以便能在含有抗生素的平板上生長菌落。步驟1、製備含有amp抗生素的lb平板。2、取一個1.
5ml離心管，加入100μl感受態細胞懸液，置冰上：加入20ul質粒t+g(提取的質粒dna稀釋500x)，用移液器輕柔混勻。冰上靜置20min。
3、42℃水浴中熱激90秒，然後迅速置冰上3~5min。整個過程不要振盪菌液。4、加入1mllb液體培養基(不含抗生素)，混勻後37℃振盪培養(180rpm)1小時，使細菌恢復正常生長狀態，並表達質粒編碼的抗生素抗性基因。
5、取100ul菌液，至含有抗生素amp的lb固體培養基上，塗布均勻。6、待菌液被培養基吸收後，37℃倒置培養12~16小時，菌落生長良好而又未互相重疊時，取出。7、計算轉化率8、統計每一個培養皿中的菌落數。
9、轉化後在含抗生素的平板上長出的菌落即為轉化子，根據此皿中的菌落數可計算出轉化子總數和轉化頻率，公式如下：10、轉化子總數=菌落數×稀釋倍數×轉化反應原液總體積/塗板菌液體積;11、轉化頻率(轉化子數/μg質粒dna)=轉化子總數/質粒dna加入量(μg)
2樓：桃子殿下
有效，有一次著急先加了培養基後做了熱激，塗板後，長出了菌落。
質粒dna轉化大腸桿菌感受態細胞再熱激以後進行活化培養，這時培養基為什麼不加入抗生素
3樓：貓貓丶v歒
活化培養用的一般是soc培養基，這種培養基比lb培養基營養，此時進行的活化培養只是為了讓大腸桿菌迅速復甦，恢復**活性，此時的細胞還不具抗性，加入抗生素會細胞會死亡。
轉化之後復甦感受態細胞能用加了氨苄的lb培養基嗎
4樓：北京索萊寶科技****
是不應該bai
加的。熱激就是讓菌體瞬du間熱脹，表面蛋zhi白dao掉下來形成通道，版
質粒才能進去，權這個過程對細菌是有傷害的。菌體42度熱激之後很脆弱。另外熱激時會死一部分細菌，死掉的細菌會裂解，釋放出一些蛋白酶什麼的，對活著的細菌也不太好。
用不加抗生素的lb37度溫浴是為了讓還活著的細菌更好的復甦。如果加了抗生素會增加細菌復甦時的負擔。但是溫浴的時間也不宜過長，一般以半個小時到一個小時之間為宜。
轉化實驗中，熱激完成後，感受態細胞為什麼要繼續冰上放置5 分鐘
5樓：匿名使用者
化轉時,感受態細胞膜由於吸附陽離子（ca2+等）呈液晶狀態,受到熱激後,細胞膜出現裂隙,外源dna進入細胞,此時細胞非常脆弱,將其冰浴冷卻,細胞膜修復閉合,進行下一步的復甦時細胞存活率將提高.
轉化感受態細胞時 ,熱激後冷卻時間長 會有怎樣影響
6樓：
應該沒有關係，關鍵是熱激的90秒。這個嚴格控制應該就沒有問題。當然就實驗準則來說，過長的冷卻時間可能使細胞生物活性降低，從而在後期培養中無法達到滿意的效果。。。
7樓：浙大阿米巴
個人感覺熱激後冰浴時間長點沒有什麼關係吧
大腸桿菌感受態製備為什麼要冰上操作
熊貓死忠 這問題要詳細講起來牽涉到很多其他概念，不知道你的基礎如何，我試著歸納一下主要原因吧 先回答第二個問題，用對數期細菌因為對數期細胞生長旺盛，新生細胞壁薄，細胞膜通透性好，外源dna容易進入，同時意味著各種dna複製所需的酶在細胞內全數到位，當外源dna進入後有現成材料可以利用，迅速複製，重組...