1樓：鬱悶神馬
1. elisa的原理
elisa的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。
用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
加入酶反應的底物後，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由於酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
操作步驟:
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和乾燥劑請放回鋁箔袋內壓 實自封條，密封口袋，放回4℃。
2．空白孔加標準品和標本稀釋液，其餘相應孔中加標本或不同濃度標準品(100ul/孔)，用封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育90分鐘。
3．提前20分鐘準備生物素化抗體工作液。
4．洗板5次。
5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其餘孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育60分鐘。
6．提前20分鐘準備酶結合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7．洗板5次。
8．空白孔加酶結合物稀釋液，其餘孔加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。
9．開啟酶標儀電源，預熱儀器，設定好檢測程式。
10．洗板5次。
11．加入顯色底物(tmb)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。
12．加入終止液100ul/孔, 混勻後即刻測量od450值(3分鐘內)。在儀器儲存讀數結果並列印一份紙質結果。
13．實驗完畢後將未用完的試劑按規定的儲存溫度放回電冰箱儲存至有效期結束。
建議儲存酶標板框，以備下次或者今後試驗使用。
2樓：匿名使用者
elisa原理就是固定化抗原或抗體與抗體或抗原之間的免疫相互作用。基本步驟就是：包埋、封閉、競爭、洗滌、結合、洗滌、底物反應、測量分析。
3樓：匿名使用者
檢測原理: 本實驗採用雙抗體夾心elisa法。抗人il-4單抗包被於酶標板上，操作步驟: 1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和
elisa原理和具體試驗方法以及結果處理？ 10
4樓：匿名使用者
lisa檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的hev多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型hev毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自於該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中並孵育，如果其中存在hev igm抗體，這些抗體就會與hev 的多肽抗原結合，並固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然後加入羊抗人igm-hrp(辣根過氧化物酶)酶結合物，經第二次孵育後，酶結合物就會與第一次孵育結合上的hev igm抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入tmb底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，只有那些含有hev igm抗體和酶結合物所形成的複合物的孔才會發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，並在波長:
450nm處測量o.d.值,按照本hev igm抗體elisa試劑盒 的測試標準, o.
d.值大於或等於cut-off值的樣品被認為是初試陽性操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的儘量做復孔。
3. 加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔、加入待測樣品50ul於反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振盪混勻，37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振盪30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-hrp，輕輕振盪混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振盪30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物a、b各50ul，輕輕振盪混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的od值。
結 果 判 斷 與 分 析：
1、 儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的od值
2、 以吸光度od值為縱座標（y），相應的s-100b標準品濃度為橫座標（x），做得相應的曲線，樣品的s-100b含量可根據其od值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與od值計算出標準曲線的迴歸方程式，將樣品的od值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
3、 檢測值範圍： 0-200ng/ml
4、 敏感度：1.0ng/ml
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