1樓：致愛約定
一、凝膠製備時：temed和ap要後加，加入後用玻棒緩慢勻速的混勻，避免有氣泡產生；然後馬上注入電泳槽內，插入梳子，這時也要勻速，但不能太慢，因為太慢的話底部的膠會比上面的膠凝的快，影響膠的質量，同時小心有氣泡；
二、加樣時要注意：1.每空的上樣量不能過大，以免樣品溢位，造成各泳道相互汙染;
2.為了避免邊緣效應，在未加樣的泳道加入等量的樣品緩衝液。注意事項
（1）由於與凝膠聚合有關的矽橡膠稱、玻璃板表面不光滑潔淨，在電泳時會造成凝膠板與玻璃板或矽橡膠條剝離，產生氣泡或滑膠；剝膠時凝膠板易斷裂，為防止引現象，所用器材均應嚴格地清洗。矽橡膠條的凹槽、樣品槽模板及電泳槽用泡沫海綿蘸取「洗潔淨」仔細清洗。玻璃板浸泡在重鉻酸鉀洗液3～4h或0.
2mol/l koh的酒精溶液中20min以上，用清水洗淨，再用泡沫海綿蘸取「洗潔淨」反覆刷洗，最後用蒸餾水沖洗，直接陰乾或用乙醇沖洗後陰乾。
（2）安裝電泳槽和鑲有長、短玻璃板的矽橡膠框時，位置要端正，均勻用力旋緊固定螺絲，以免緩衝液滲漏。樣品槽板梳齒應平整光滑。
（3）在不連續電泳體系中，預電泳只能在分離膠鄉合後進行。洗淨膠面後才能製備濃縮膠。濃縮膠製備後，不能進行預電泳，以充分利用濃縮膠的濃縮效應。
（4）電泳時，電泳儀與電泳槽間正、負極不能接錯，以免樣品反方向泳動，電泳時應選用合適的電流、電壓，過高或過低無可影響電泳效果。
（5）sds純度：在sds-page中，需高純度的sds，市售化學純sds需重結晶一次或兩次方可使用。重結晶方法如下：
稱20g sds放在圓底燒瓶中，加300ml無水乙醇及約半牛角匙活性碳，在燒瓶上接一冷凝管，在水浴中加熱至乙醇微沸，迴流約10min，用熱布氏漏斗趁熱過濾。濾液應透明，冷卻至室溫後，移至-20℃冰箱中過夜。次日用預冷的布氏漏斗抽濾，再用少量-20℃預冷的無水乙醇洗滌白色沉澱3次，儘量抽乾，將白色結晶置真空乾燥器中乾燥或置40℃以下的烘箱中烘乾。
（6）用sds處理蛋白質樣品時，每次都會在沸水溶中保溫3～5min，以免有亞穩聚合物存在。
（7）標準蛋白質的相對遷移率最好在0.2～0.8之間均勻分佈。
值得指出的是，每次測定未知物分子量時，都應同時用標準蛋白製備標準曲線，而不是利用過去的標準曲線。用此法測定的分子量只是它們的亞基或單條肽鏈的分子量，而不是完整的分子量。為測得精確的分子量範圍，最好用其他測定蛋白分子量的方法加以校正。
此法對球蛋白及纖維狀蛋白的分子量測定較好，對糖蛋白，膠原蛋白等分子量測定差異較大。
（8）對樣品的要求：應採納低離子強度的樣品。如樣品中離子強度高，則應透析或經離子交換除鹽。
加樣時，應保持凹形加樣槽膠面平直。加樣量以10～15μl為宜，如樣品系較稀的液體狀，為保證區帶清晰，加樣量可增加，同時應將樣品溶解液濃度提高二倍或更高。
（9）由於凝膠中含sds，直接製備幹板會產生龜裂現象。如需制幹板，則用25%異丙醇內含7%乙酸浸泡，並經常換液，直到sds脫盡（約需2～3天），才可製備幹板。為方便起見，常採用照像法，儲存**。
2樓：happy和
1、電泳槽中的膠板不要夾得太緊，不然電泳泳道易發彎。
2、染色液要混勻，染色時間不宜過長，否則不易區分目的帶。
3、點樣時一定要點上marker。
sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳分離血清蛋白質的實驗中，當分離膠加完之後為什麼需要在上面加一層水？
3樓：匿名使用者
加一層水稱為水封
目的是隔絕空氣使催化反應快速進行，進
而形成凝膠，還可使分離膠上版沿平直。
並且權加水後，保持分離膠表面的平整性，使濃縮膠和分離膠都處於同一水平面上。
甘氨酸是為了解離出甘氨酸根離子，甘氨酸根離子可以穩定的介面，使蛋白聚集在移動介面附近，濃縮在一起。
樣品液煮沸這個問題我個人認為是可以商榷的，因為理論上煮沸可以使sds和蛋白更快更好的結合，以便於sds-page的進行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上樣結果更好。對於非還原loading buffer（即不含巰基乙醇）的樣品，一般是不要煮沸的。
長時間的電泳會使正極變酸，負極變鹼。
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