1樓：禁偌寒蟬
基因研究中，敲除基因，研究該基因的功能是最常用的套路。一般 shrna 可通過 rna 干擾來抑制基因的表達， 是基因研究中必不可少的環節。下面就主要圍繞設計 shrna 引物序列，手把手教你構建 shrna 質粒，輕鬆敲基因。
shrna 的設計原則。
1. 克隆到 shrna 表達載體中的 shrna 包括兩個短反向重複序列，中間由一莖環序列分隔的，組成髮夾結構，由 polⅲ 啟動子控制。隨後在連上 5～6 個 t 作為 rna 聚合酶 ⅲ 的轉錄終止子。
2. 兩個互補的寡核苷酸兩端須帶有限制性酶切位點。
3. shrna 插入片段中的莖環應當靠近寡核苷酸的**。
4. 5～6 個 t 必須放置在 shrna 插入片段尾部以確保 rna 聚合酶 iii 終止轉錄。
5. 在正義鏈和反義鏈序列上不能出現連續 3 個或以上的 t。這可能導致 shrna 轉錄的提前終止。
2樓：魚骨頭愛游泳
shrna可以和mrna一段序列互補配對，比如與3『非翻譯序列結合，然後由特定的核酸酶識別，並降解mrna，並不是在基因組中把基因敲掉。
rna干擾實驗中怎樣防止rna降解
3樓：匿名使用者
rna干擾回覆實驗，主要是為了說明off-target效應。 off-target effects（脫靶效應）最早由dharmacon科學家jackson和他的同事們提出（fedorov,y.,et al.
off-targeting by sirna can induce toxic phenotype. rna accepted (2006).）他們給細胞轉染特定基因的單條sirna後運用全基因組晶片檢測技術鑑定表達上調/下調1.
5到3倍的靶基因數量。研究人員發現在這種情況下有大量的基因被非特異性的調控著。sirna正義鏈和反義鏈與脫靶基因的互補水平有高有低，並且每條sirna所引發的脫靶基因表達譜也不盡相同，反映了序列依靠性的脫靶效應。
簡單來說，off-target效應就是指干擾shrna序列進入了microrna途徑，通過microrna途徑，其可以不受完全互補的限制而調控大量靶基因的表達。原本需要19~23nt的rna序列完全互補才能發生干擾作用，而如果進入microrna途徑，只需要11~15nt互補就可以產生干擾效果，這使得sirna可能與非靶基因結合而導致非靶基因沉默，造成脫靶。 如果脫靶干擾的部分基因，正好與目的基因位於同一訊號通路中，或者與目的基因的生物學功能相似，那麼，如果因脫靶而干擾了其它基因，亦會造成和目的基因受到干擾後相同的細胞表型改變。
而實際上，可能選擇的這條shrna序列並沒有對目的基因造成有效干擾，或者雖然干擾了目的基因，但是並不會引起預期的細胞表型改變。
基於以上原因，自從off-target效應被發現並被研究者們廣泛認同後，越來越多的雜誌要求研究者們在投稿時需要有相應的對照來說明off-target效應。即您需要有相關對照或者實驗來說明，您所獲得的實驗結果，不是由於off-target效應而產生的。
為什麼用shrna敲低基因時靶基因pcr反而上升
4樓：網友
一是shrna沒有選擇好。如果offtarget效應是作用在靶基因的上調基因上，靶基因的pcr會上升。另外，基因表達具有負反饋通路。
通過生物效應來調節。生物效應的中補償性調節會大幅度增加rna的轉錄，使靶基因pcr表現出升高的現象。
獲取目的基因的常用方法是哪種，獲取目的基因的常用方法是哪種？
剛好學到 基因工程流程的第一步就是獲得目的dn 段,如何獲得目的dn 段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的 不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr法 化學合成法 cdna法及建立基因文庫的方法來篩選 直接獲取 1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你...
從基因文庫中獲取目的基因的根據是
飛雪之靈 根據就是基因文庫是對某一物種基因組進行覆蓋而構建的文庫，文庫一定包含所需的目的基因。方法是 1.從供體中製備高純度的染色體基因組dna 2.用合適的限制酶把dna切割成若干個片段 3.將這些片段分別與適當的載體分子進行體外連線 4.重組載體匯入受體細胞中或包裝成噬菌體，適宜條件下培養 5....
在古時，打更的時間怎麼算，古代是如何打更的 敲幾下 怎麼敲 怎麼喊 什麼用
楊子電影 圭表是我國最古老的一種計時器，是利用太陽射影的長短來判斷時間的 日晷也是通過觀測日影計時的儀器，主要是根據日影的位置以確定當時的時辰或刻數，晷針的投影像鐘錶的指標一樣在晷面上移動，就可以指示時辰。圭表和漏刻都是用太陽的影子計算時間的，然而遇到了陰雨天或黑夜便失去作用了，於是一種白天黑夜都能...