獲取目的基因的常用方法是哪種,獲取目的基因的常用方法是哪種?

時間 2021-08-30 09:49:12

1樓:匿名使用者

..剛好學到

基因工程流程的第一步就是獲得目的dn**段,如何獲得目的dn**段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的**,不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr法、化學合成法、cdna法及建立基因文庫的方法來篩選

直接獲取

1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了(基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程式如下:

① 選用特定限制性內切酶, dna進行部分酶解,得到dna限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體dna。③ 經適當處理,將基因組dna限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。

⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌,形成大量噬菌斑,從而形成含有整個dna的重組dna群體,即文庫。)經典解釋

2.cdna文庫法(即原教材中提到的逆轉錄法)。cdna文庫,是指彙集以某生物成熟mrna為模板逆轉錄而成的cdna序列的重組dna群體。

雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因,但是由於高等真核生物基因組dna文庫比其cdna文庫大得多,相關工作量同樣大得多。更為重要的是,在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子,但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在,所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列,即不能表達真核生物dna。而在真核生物成熟mrna中已不存在間隔序列(已在拼接過程中被去除),所以可以以真核生物成熟mrna為模板,逆轉錄而成的cdna可被大腸桿菌表達。

因此,在基因工程中,cdna文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。

3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥,無論哪一顆彈粒擊中目標,都能把鳥打下來。

鳥槍法的具體做法是:用限制酶(即限制性內切酶)將供體細胞中的dna切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分別在受體細胞中大量複製(在遺傳學中叫做擴增),從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法吧帶有目的基因的dn**段分離出來。如許多抗蟲,抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。

用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便,缺點是工作量大,具有一定的盲目性。

人工合成

1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過dna自動合成儀,通過固相亞磷酸醯胺法合成,具體過程可以網上查詢,反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連線上去成為核苷酸序列,一般適於分子較小而不易獲得的基因。

對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物,再利用引物獲得目的基因。

2.聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,pcr)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重複性好、易自動化等突出優點;能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一dn**段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷;可從一根毛髮、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的dna供分析研 究和檢測鑑定。

過去幾天幾星期才能做到的事情,用pcr幾小時便可完成。pcr技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑

他只是給目的基因的擴增

好累~....

2樓:月貓鼬

1.從基因文庫中獲取目的基因:將含有某種生物的許多dn**段,匯入受體菌

的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物不同的基因,稱為基因文庫。

當需要某一片段時,根據目的基因的有關資訊,如根據基因的核苷酸序列、基因的功能、基因

在染色體上的位置、基因的轉錄產物mrna,以及基因的表達產物蛋白質等特性來獲取目的基

因。2.化學合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用dna合成儀直接合成。

3.用pcr技術擴增技術提取。已知目的基因引物的序列,將整個dna放入合成儀,因為只有當

引物與模板結合後dna熱聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中間的目的基因被大量擴增,

即被提取出來。

3樓:匿名使用者

建立基因文庫、pcr技術、人工合成

4樓:梧桐棺材

從基因文庫中提取 人工合成

5樓:火焰真諦

基因組文庫,pcr增殖技術

獲取目的基因的方法有哪些(詳細)

6樓:奔三不再二

獲取目的基因的方法主要有兩種:

一是從供體細胞的dna中直接分離基因,最常用的方法是「鳥槍法」又叫「散彈射擊法",另一種是人工合成基因,這種方法有兩條途徑,

二是以目的基因轉錄的信使rna為模板,反轉錄成互補的單鏈dna,再在酶的作用下合成雙鏈dna,即目的基因,另一條途徑是蛋白質的氨基酸序列,推測出信使rna序列,再推測出結構基因的核苷酸序列,然後用化學的方法以單核苷酸為原料合成.

7樓:匿名使用者

..剛好學到

基因工程流程的第一步就是獲得目的dn**段,如何獲得目的dn**段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的**,不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr法、化學合成法、cdna法及建立基因文庫的方法來篩選

直接獲取

1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了(基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程式如下:

① 選用特定限制性內切酶, dna進行部分酶解,得到dna限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體dna。③ 經適當處理,將基因組dna限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。

⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌,形成大量噬菌斑,從而形成含有整個dna的重組dna群體,即文庫。)經典解釋

2.cdna文庫法(即原教材中提到的逆轉錄法)。cdna文庫,是指彙集以某生物成熟mrna為模板逆轉錄而成的cdna序列的重組dna群體。

雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因,但是由於高等真核生物基因組dna文庫比其cdna文庫大得多,相關工作量同樣大得多。更為重要的是,在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子,但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在,所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列,即不能表達真核生物dna。而在真核生物成熟mrna中已不存在間隔序列(已在拼接過程中被去除),所以可以以真核生物成熟mrna為模板,逆轉錄而成的cdna可被大腸桿菌表達。

因此,在基因工程中,cdna文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。

3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥,無論哪一顆彈粒擊中目標,都能把鳥打下來。

鳥槍法的具體做法是:用限制酶(即限制性內切酶)將供體細胞中的dna切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分別在受體細胞中大量複製(在遺傳學中叫做擴增),從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法吧帶有目的基因的dn**段分離出來。如許多抗蟲,抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。

用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便,缺點是工作量大,具有一定的盲目性。

人工合成

1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過dna自動合成儀,通過固相亞磷酸醯胺法合成,具體過程可以網上查詢,反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連線上去成為核苷酸序列,一般適於分子較小而不易獲得的基因。

對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物,再利用引物獲得目的基因。

2.聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,pcr)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重複性好、易自動化等突出優點;能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一dn**段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷;可從一根毛髮、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的dna供分析研 究和檢測鑑定。

過去幾天幾星期才能做到的事情,用pcr幾小時便可完成。pcr技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑

他只是給目的基因的擴增

好累~....

8樓:abc高分高能

如何從基因文庫中獲取目的基因

9樓:糟油酒丸

請看擺渡百科「人工合成基因」條目。

直接獲取的。。。用引物pcr出來--請看擺渡百科「分子克隆」條目。

從基因文庫中獲取目的基因的根據是

飛雪之靈 根據就是基因文庫是對某一物種基因組進行覆蓋而構建的文庫,文庫一定包含所需的目的基因。方法是 1.從供體中製備高純度的染色體基因組dna 2.用合適的限制酶把dna切割成若干個片段 3.將這些片段分別與適當的載體分子進行體外連線 4.重組載體匯入受體細胞中或包裝成噬菌體,適宜條件下培養 5....

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