1樓：睡完這輩子
鹼裂解法：此方法適用於小量質粒dna的提取，提取的質粒dna可直接用於酶切、pcr擴增、銀染序列分析。方法如下：
1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞於2ml lb培養基。
2、37℃振盪培養過夜。
3、取1.5ml菌體於ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4、加0.lml溶液i(1％葡萄糖，50mm/l edta ph8.0，25mm/l tris-hcl ph8.0)充分混合。
5、加入0.2ml溶液 ii(0.2 mm/l naoh，1％ sds)，輕輕翻轉混勻，置於冰浴5 min 。
6、加入0.15m1預冷溶液iii(5 mol/l kac，ph4.8)，輕輕翻轉混勻，置於冰浴5 min 。
7、以10，000rpm離心20min，取上清液於另一新ep管
8、加入等體積的異戊醇，混勻後於?0℃靜置10min。
9、再以10，000rpm離心20min，棄上清。
10、用70％乙醇0．5ml洗滌一次，抽乾所有液體。
11、待沉澱乾燥後，溶於0．05mlte緩衝液中
質粒匯入大腸桿菌要用什麼處理該菌,以使其處於什麼細胞狀態,從而吸收dna分子
2樓：四月愛吃抹茶
將大腸桿菌用氯化鈣處理，以增大大腸桿菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質粒能夠進入受體細胞，此時的細胞處於感受態（理化方法誘導細胞，使其處於最適攝取和容納外來dna的生理狀態）。
3樓：匿名使用者
lz出的填空題》？
用cacl2或者電擊處理該菌使其處於感受態細胞狀態
4樓：匿名使用者
細菌處於容易接受外源dna的狀態叫感受態。常用的感受態細胞的製備方法有tss和氯化鈣轉化法。幾句話說不清，可以去丁香園那邊的論壇看看，會有比較詳細的介紹。
5樓：匿名使用者
用氯化鈣或其他buffer使細胞膜通透性增強，這樣的細胞叫做感受態細胞。
6樓：匿名使用者
從而吸收dna分子懸賞分: 0 -離問題結束還有質粒匯入大腸桿菌要用鈣離子處理該菌,以使其處於感受態細胞狀態,從而吸收dna分子
7樓：酈晟展雁
質粒圖一般有三條帶，因為提取的質粒有超螺旋，歡型和線性三種形態，三種形態的質粒由於形態的差異在瓊脂糖膠電泳的速度有差異，所以會形成三條帶。一條很快，離另外兩條較遠，另外兩條很近~
提取大腸桿菌dna為什麼不直接提取細胞核中進行提取的dna而要從細胞質的質粒中提取?
8樓：匡雅霜
基因組dna可以提取，質粒dna也可以提取，要看你需要的目的基因是位於基因組上還是質粒上，要哪個部分就提取哪個部分。
在基因工程中，質粒是一個非常理想的載體，大部分的目的基因會先匯入到質粒中進行擴增，所以提取質粒dna的情況會經常遇到，這可能給你造成了錯覺。
9樓：匿名使用者
大腸桿菌沒有細胞核，只有擬核和質粒dna。
在基因工程中，質粒是一個非常理想的載體，大部分的目的基因會先匯入到質粒中進行擴增，所以一般提取質粒dna。
怎麼判斷從大腸桿菌中提取的質粒dna，是環狀的還是線狀的？
10樓：亓楣風
可以在高倍顯微鏡下觀察啊
應該是最簡單最直接的了額
我們上次的實驗就是用油鏡觀察細胞內的染色體形態
如何以大腸桿菌質粒dna為載體克隆人的p53基因？並作最終鑑定。
11樓：匿名使用者
就是利用基
來因工程
首先源提取目的基因 從細bai胞的信使rna中提du取出p53基因構建基因表zhi達載體
dao 將目的基因p53和載體-大腸桿菌質粒重組將目的基因匯入受體細胞 可以選擇大腸桿菌或動植物細胞作為受體細胞，匯入重組dna
檢測和鑑定 可採用發射性同位素標記法檢測p53
12樓：匿名使用者
方法1;這個蛋白很普遍，應該有相當多的實驗有現成的質粒，直接去求就可以。去回ncbi上搜尋一下，答這類的文章非常多。
方法2:自己構建時，主要將你從人源細胞系中抽提總mrna,然後反轉錄。
將反轉錄的總cdna作為模板，通過pcr 特異的p53引物，克隆出這個基因
然後凝膠電泳分離純化pcr產物；然後將該pcr產物插入到帶有抗性的大腸桿菌質粒中。
塗板後，篩選陽性克隆數個，再用酶切作鑑定，找到合適的質粒；
最後再將該質粒進行測序。確定該質粒無突變。
13樓：亮亮眾裡尋他
首先來是活的cdna：
提取細胞總
源rna→設計引物，反轉錄pcr得到p53的cdna→凝膠電泳並**目的片段→純化→將純化後的片段與t載體連線(16℃ 過夜)→轉化jm109感受態細胞→塗布氨苄抗性平板→37℃ 過夜培養→挑取轉化子→菌落pcr驗證→電泳分析得到陽性轉化子→將陽性轉化子接種lb培養基37℃培養過夜→收集菌體→提取質粒→得到p53基因的克隆載體。
14樓：忽而一夢
mrna很容易分解的~~~很難提取
如果你能提取到,首先逆轉錄pcr合成cdna將cdna轉入質粒中(用限制性內切酶酶切)再將重組質粒匯入大腸桿菌
大腸桿菌基因組dna提取和質粒dna提取的異同點
15樓：匿名使用者
提取的步驟基本上都屬dna的提取步驟,包括細胞裂解,dna釋放,純化,最後沉澱溶解.
質粒提取過程中,有一個dna變性、復性的過程,這個與基因組提取完全不同,這是利用質粒是以超螺旋結構存在於大腸桿菌中的特殊狀態,分離純化質粒時總是會利用這個特點來分離基因組dna與質粒dna.
大腸桿菌提取的質粒有哪三種構型
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