試分析影響電泳的主要因素有哪些,什麼是電泳?其影響因素有哪些

時間 2021-09-04 19:19:02

1樓:匿名使用者

影響電泳的主要因素為:

1.電泳介質的ph值

溶液的ph值決定帶電物質的解離程度,也決定物質所帶淨電荷的多少.對蛋白質,氨基酸等類似兩性電解質,ph值離等電點越遠,粒子所帶電荷越多,泳動速度越快,反之越慢。因此,當分離某一種混合物時,應選擇一種能擴大各種蛋白質所帶電荷量差別的ph值,以利於各種蛋白質的有效分離.

為了保證電泳過程中溶液的ph值恆定,必須採用緩衝溶液。

緩衝液的離子強度

溶液的離子強度(ion intensity)是指溶液中各離子的摩爾濃度與離子價數平方的積的總和的1/2.帶電顆粒的遷移率與離子強度的平方根成反比。低離子強度時,遷移率快,但離子強度過低,緩衝液的緩衝容量小,不易維持ph恆定.

高離子強度時,遷移率慢,但電泳譜帶要比低離子強度時細窄。通常溶液的離子強度在0.02~0.

2之間。

i=1/2∑cizi2 (i:離子強度;ci:離子的摩爾濃度;zi:離子價數. )

0.154m nacl溶液的離子強度為:

i= 1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154

0.015m na2so4溶液的離子強度為:

i= 1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

3.電場強度

電場強度(電勢梯度electric field intensity)是指每釐米的電位降(電位差或電位梯度).電場強度對電泳速度起著正比作用,電場強度越高,帶電顆粒移動速度越快。根據實驗的需要,電泳可分為兩種:

一種是高壓電泳,所用電壓在500~1000v或更高.由於電壓高,電泳時間短(有的樣品需數分鐘),適用於低分子化合物的分離,如氨基酸,無機離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高,產熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質等物質的變性而不能分離,還因發熱引起緩衝液中水分蒸發過多,使支援物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強度增加,以及引起虹吸現象(電泳槽內液被吸到支援物上)等,都會影響物質的分離.

另一種為常壓電泳,產熱量小,室溫在10~25℃分離蛋白質標本是不被破壞的,無需冷卻裝置,一般分離時間長。

4.電滲現象

在電場中液體對於一個固體的固定相相對移動稱為電滲.在有載體的電泳中,影響電泳移動的一個重要因素是電滲。最常遇到的情況是γ-球蛋白,由原點向負極移動,這就是電滲作用所引起的倒移現象.

產生電滲現象的原因是載體中常含有可電離的基團,如濾紙中含有羥基而帶負電荷,與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷,液體便向負極移動。由於電滲現象往往與電泳同時存在,所以帶電粒子的移動距離也受電滲影響;如電泳方向與電滲相反,則實際電泳的距離等於電泳距離加上電滲的距離.瓊脂中含有瓊脂果膠,,其中含有較多的硫酸根,所以在瓊脂電泳時電滲現象很明顯,許多球蛋白均向負極移動。

除去了瓊脂果膠後的瓊脂糖用作凝膠電泳時,電滲大為減弱.電滲所造成的移動距離可用不帶電的有色染料或有色葡聚糖點在支援物的中心,以觀察電滲的方向和距離。

電泳技術

帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳(electrophoresis, ep)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。

2023年,由**莫斯科大學的斐迪南·弗雷德裡克·羅伊斯(ferdinand frederic reuss)最早發現。

2023年瑞典學者a.w.k.蒂塞利烏斯設計製造了移動介面電泳儀 ,分離了馬血清白蛋白的3種球蛋白,建立了電泳技術。

2樓:脹草絕撅

電泳槽液的固體份。

槽液的ph值。

槽液的溫度。

槽液的電導率。

槽液的溶劑含量。

什麼是電泳?其影響因素有哪些

3樓:

帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳其影響因素有

1.電泳介質的ph值

溶液的ph值決定帶電物質的解離程度,也決定物質所帶淨電荷的多少.因此,當分離某一種混合物時,應選擇一種能擴大各種蛋白質所帶電荷量差別的ph值,以利於各種蛋白質的有效分離.為了保證電泳過程中溶液的ph值恆定,必須採用緩衝溶液。

3.電場強度

電場強度對電泳速度起著正比作用,電場強度越高,帶電顆粒移動速度越快。

4.電滲現象

在電場中液體對於一個固體的固定相相對移動稱為電滲.在有載體的電泳中,影響電泳移動的一個重要因素是電滲。

影響蛋白質電泳分離效果的主要因素有哪些

4樓:暮紫淺淺

影響蛋白質電泳的主要因素為:

1.電泳介質的ph值

溶液的ph值決定帶電物質的解離程度,也決定物質所帶淨電荷的多少.對蛋白質,氨基酸等類似兩性電解質,ph值離等電點越遠,粒子所帶電荷越多,泳動速度越快,反之越慢。因此,當分離某一種混合物時,應選擇一種能擴大各種蛋白質所帶電荷量差別的ph值,以利於各種蛋白質的有效分離.

為了保證電泳過程中溶液的ph值恆定,必須採用緩衝溶液。

2.緩衝液的離子強度

溶液的離子強度(ion intensity)是指溶液中各離子的摩爾濃度與離子價數平方的積的總和的1/2.帶電顆粒的遷移率與離子強度的平方根成反比。低離子強度時,遷移率快,但離子強度過低,緩衝液的緩衝容量小,不易維持ph恆定.

高離子強度時,遷移率慢,但電泳譜帶要比低離子強度時細窄。通常溶液的離子強度在0.02~0.

2之間。

i=1/2∑cizi2 (i:離子強度;ci:離子的摩爾濃度;zi:離子價數. )

0.154m nacl溶液的離子強度為:

i= 1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154

0.015m na2so4溶液的離子強度為:

i= 1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

3.電場強度

電場強度(電勢梯度electric field intensity)是指每釐米的電位降(電位差或電位梯度).電場強度對電泳速度起著正比作用,電場強度越高,帶電顆粒移動速度越快。根據實驗的需要,電泳可分為兩種:

一種是高壓電泳,所用電壓在500~1000v或更高.由於電壓高,電泳時間短(有的樣品需數分鐘),適用於低分子化合物的分離,如氨基酸,無機離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高,產熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質等物質的變性而不能分離,還因發熱引起緩衝液中水分蒸發過多,使支援物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強度增加,以及引起虹吸現象(電泳槽內液被吸到支援物上)等,都會影響物質的分離.

另一種為常壓電泳,產熱量小,室溫在10~25℃分離蛋白質標本是不被破壞的,無需冷卻裝置,一般分離時間長。

4.電滲現象

在電場中液體對於一個固體的固定相相對移動稱為電滲.在有載體的電泳中,影響電泳移動的一個重要因素是電滲。最常遇到的情況是γ-球蛋白,由原點向負極移動,這就是電滲作用所引起的倒移現象.

產生電滲現象的原因是載體中常含有可電離的基團,如濾紙中含有羥基而帶負電荷,與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷,液體便向負極移動。由於電滲現象往往與電泳同時存在,所以帶電粒子的移動距離也受電滲影響;如電泳方向與電滲相反,則實際電泳的距離等於電泳距離加上電滲的距離.瓊脂中含有瓊脂果膠,,其中含有較多的硫酸根,所以在瓊脂電泳時電滲現象很明顯,許多球蛋白均向負極移動。

除去了瓊脂果膠後的瓊脂糖用作凝膠電泳時,電滲大為減弱.電滲所造成的移動距離可用不帶電的有色染料或有色葡聚糖點在支援物的中心,以觀察電滲的方向和距離。

5樓:匿名使用者

待分離生物大分子的性質,待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質都會對電泳有明顯影響。一般來說,子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形,則其電泳遷移速度越快.

緩衝液的性質,緩衝液的ph值會影響待分離生物大分子的解離程度,從而對其帶電性質產生影響。溶液ph值距離其等電點愈遠,其所帶淨電荷量就越大,電泳的速度也就越大。

電場強度,電場強度越大,電泳速度越快。但增大電場強度會引起通過介質的電流強度增大,而造成電泳過程產生的熱量增大。

電滲,在電場的作用下向負極遷移,帶動電極液產生向負極的電滲流。如果電滲方向與待分離分子電泳方向相同,則加快電泳速度,如果相反,則降低電泳速度。

影響毛細管電泳分離的主要因素有哪些

6樓:理工可愛小達人

緩衝液

緩衝試劑的選擇主要由所需的ph決定,在相同的ph下,不同緩衝試劑的分離效果不盡相同,有的可能相差甚遠。ce中常用的緩衝試劑有:磷酸鹽、硼砂或硼酸、醋酸鹽等。

緩衝鹽的濃度直接影響到電泳介質的離子強度,從而影響zeta電勢,而zeta電勢的變化又會影響到電滲流。緩衝液濃度升高,離子強度增加,雙電層厚度減小,zeta電勢降低,電滲流減小,樣品在毛細管中停留時間變長,有利於遷移時間短的組分的分離,分析效率提高。同時,隨著電解液濃度的提高,電解液的電導將大大高於樣品溶液的電導而使樣品在毛細管柱上產生堆積的效果,增強樣品的富集現象,增加樣品的容量,從而提高分析靈敏度。

但是,電解液濃度太高,電流增大,由於熱效應而使樣品組分蜂形擴充套件,分離效果反而變差。此外,離子還可以通過與管壁作用以及影響溶液的粘度、介電常數等來影響電滲,離子強度過高或過低都對提高分離效率不利。

ph值

緩衝體系ph的選擇依樣品的性質和分離效率而定,是決定分離成敗的一大關鍵。不同樣品需要不同的ph分離條件,控制緩衝體系的ph值,一般只能改變電滲流的大小。ph能影響樣品的解離能力,樣品在極性強的介質中離解度增大,電泳速度也隨之增大,從而影響分離選擇性和分離靈敏度。

ph還會影響毛細管內壁矽醇基的質子化程度和溶質的化學穩定性,ph在4-10之間,矽醇基的解離

度隨ph的升高而升高,電滲流也隨之升高。因此,ph為分離條件優化時不可忽視的因素。

分離電壓

在ce中,分離電壓也是控制電滲的一個重要引數。高電壓是實現ce快速、高效的前提,電壓升高,樣品的遷移加大,分析時間縮短,但毛細管中焦耳熱增大,基線穩定性降低,靈敏度降低;分離電壓越低,分離效果越好,分析時間延長,峰形變寬,導致分離效率降低。因此,相對較高的分離電壓會提高分離度和縮短分析時間,但電壓過高又會使譜帶變寬而降低分離效率。

電解質濃度相同時,非水介質中的電流值和焦耳熱均比水相介質中小得多,因而在非水介質中允許使用更高的分離電壓。

溫度

溫度影響分離重現性和分離效率,控制溫度可以調控電滲流的大小。溫度升高,緩衝液粘度降低,管壁矽輕基解離能力增強,電滲速度變大,分析時間減短,分析效率提高。但溫度過高,會引起毛細管柱內徑向溫差增大,焦耳熱效應增強,柱效降低,分離效率也會降低。

新增劑

在電解質溶液中加入新增劑,例如中性鹽、兩性離子、表面活性劑以及有機溶劑等,會引起電滲流的顯著變化。表面活性劑常用作電滲流的改性劑,通過改變濃度來控制電滲流的大小和方向,但當表面活性劑的濃度高於臨界膠束濃度時,將形成膠束。加入有機溶劑會降低離子強度,zeta電勢增大,溶液粘度降低,改變管壁內表面電荷分佈,使電滲流降低。

在電泳分析中,緩衝液一般用水配製,但用水一有機混合溶劑常常能有效改善分離度或分離選擇性。

毛細管電泳處理軟體介面

進樣

ce的常規進樣方式有兩種:流體力學和電遷移進樣。電遷移進樣是在電場作用下,依靠樣品離子的電遷移和(或)電滲流將樣品注入,故會產生電歧視現象,會降低分析的準確性和可靠性,但此法尤其適用於粘度大的緩衝液和cge情況。

流體力學進樣是普適方法,可以通過虹吸、在進樣端加壓或檢測器端抽空等方法來實現,但選擇性差,樣品及其背景同時被引入毛細管,對後續分離可能產生影響。通過進樣時間也可以來改善分離效果,進樣時間過短,峰面積太小,分析誤差大。進樣時間過大,樣品超載,進樣區帶擴散,會引起峰之間的重疊,與提高分離電壓一樣,分離效果變差。

另外,毛細管電泳技術的高分離效能以及消耗試劑少等特點使其分析領域得到了廣泛的應用,但是其常規分析的靈敏度不能適應痕量分析的要求,限制了它的應用和推廣。樣品前處理技術可以提高樣品通量或將痕量分析物進行預富集,去除樣品基質,將其與毛細管電泳技術聯用不僅可以提高分析的靈敏度,同時也消除了大部分可能的基質干擾,是一種比較理想的富集分離檢測技術。常用的有ce一流動注射聯用技術、固相萃取-ce聯用技術、固相微萃取-ce聯用技術、液相微萃取-ce聯用技術、微透析-ce聯用技術和膜萃取-ce聯用技術。

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