1樓：匿名使用者
1、利用真核生物的polya，rt-pcr後電泳；
2、根據核酸序列，估算對應的核酸序列的長度範圍；
3、根據電泳結果選擇合適的條帶，**片段；
4、測序後，對比相應的氨基酸序列，選擇目的基因。
2樓：
用該種基因對應的限制性內切黴，分割dna可得。
急用！一論述題:如何克隆一個功能性基因，如何在原核系統中高效表達？ 50
3樓：我和家人
這題目考查的就是基因工程的步驟，詳細敘述下基因工程的步驟即可。
提取目的基因：主要有兩條途徑：如果目的基因序列已知，則用限制性內切酶從供體細胞的dna中直接分離基因；如果序列未知，則人工合成基因。
直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，用限制酶將供體細胞中的dna切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞提供的dna（即外源dna）的所有片段分別在各個受體細胞中大量複製（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法把帶有目的基因的dn**段分離出來；人工合成基因的方法主要有兩條：一條途徑是以目的基因轉錄成的信使rna為模版，反轉錄成互補的單鏈dna，然後在酶的作用下合成雙鏈dna，從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據已知的蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使rna序列，然後按照鹼基互補配對的原則，推測出它的基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以單鏈核苷酸為原料合成目的基因。
目的基因與運載體結合：這是基因工程的核心，三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和動植物病毒。如果以質粒作為運載體，首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。
然後用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量dna連線酶，催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成一個重組dna分子。
將目的基因匯入受體細胞：基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌，枯草桿菌，土壤農桿菌，酵母菌和動植物細胞等。題目為原核系統，如受體細胞是細菌，一般是將細菌用氯化鈣處理，以增大細菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。
目的基因匯入受體細胞後，就可以隨著受體細胞的繁殖而複製，由於細菌的繁殖速度非常快，在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。
目的基因的檢測和表達：目的基因匯入受體細胞後，是否可以穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑑定才能知道。檢測的方法有很多種，例如，大腸桿菌的某種質粒具有青黴素抗性基因，當這種質粒與外源dna組合在一起形成重組質粒，並被轉入受體細胞後，就可以根據受體細胞是否具有青黴素抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。
重組dna分子進入受體細胞後，受體細胞必須表現出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達過程。
4樓：匿名使用者
脅下心功1大心心情心兩個義務幣種兩
獲取目的基因的方法有哪些（詳細）
5樓：奔三不再二
獲取目的基因的方法主要有兩種：
一是從供體細胞的dna中直接分離基因,最常用的方法是「鳥槍法」又叫「散彈射擊法",另一種是人工合成基因,這種方法有兩條途徑,
二是以目的基因轉錄的信使rna為模板,反轉錄成互補的單鏈dna,再在酶的作用下合成雙鏈dna,即目的基因,另一條途徑是蛋白質的氨基酸序列,推測出信使rna序列,再推測出結構基因的核苷酸序列,然後用化學的方法以單核苷酸為原料合成.
6樓：匿名使用者
..剛好學到
基因工程流程的第一步就是獲得目的dn**段,如何獲得目的dn**段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的**,不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr法、化學合成法、cdna法及建立基因文庫的方法來篩選
直接獲取
1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了（基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程式如下：
① 選用特定限制性內切酶， dna進行部分酶解，得到dna限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體dna。③ 經適當處理，將基因組dna限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。
⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個dna的重組dna群體，即文庫。）經典解釋
2.cdna文庫法（即原教材中提到的逆轉錄法）。cdna文庫，是指彙集以某生物成熟mrna為模板逆轉錄而成的cdna序列的重組dna群體。
雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由於高等真核生物基因組dna文庫比其cdna文庫大得多，相關工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列，即不能表達真核生物dna。而在真核生物成熟mrna中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mrna為模板，逆轉錄而成的cdna可被大腸桿菌表達。
因此，在基因工程中，cdna文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。
鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內切酶）將供體細胞中的dna切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的dna（外源dna）的所有片段分別在受體細胞中大量複製（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的dn**段分離出來。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過dna自動合成儀，通過固相亞磷酸醯胺法合成，具體過程可以網上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連線上去成為核苷酸序列，一般適於分子較小而不易獲得的基因。
對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,pcr)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重複性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一dn**段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛髮、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的dna供分析研 究和檢測鑑定。
過去幾天幾星期才能做到的事情，用pcr幾小時便可完成。pcr技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑
他只是給目的基因的擴增
好累~....
7樓：abc高分高能
如何從基因文庫中獲取目的基因
8樓：糟油酒丸
請看擺渡百科「人工合成基因」條目。
直接獲取的。。。用引物pcr出來--請看擺渡百科「分子克隆」條目。
蛋白質水解是否需要能量
9樓：將素琴縱綾
追問：什麼？不太清楚？可以講清楚點嗎？某種條件下水解要能量？還有一直要能量？
回答：蛋白酶體降解途徑包括兩個主要階段。第一階段為泛素與蛋白底物的相互作用：
①高能硫酯鍵e1-泛素複合物的形成，消耗一分子atp，並釋放一分子單磷酸腺苷（amp）和一分子焦磷酸。②活化泛素（e1-泛素複合物）轉移到e2s上，釋放出e1，形成高能鍵e2-泛素複合物。③底物（被磷酸化、氧化、錯誤摺疊或與輔助蛋白結合的蛋白質）被e3s識別並與之結合。
④e2-泛素複合物上的泛素轉移到e3s上，形成高能鍵複合物，繼而底物通過賴氨酸的ε-氨基形成醯胺鍵與泛素連線，泛素分子逐個相加形成鏈狀結構。此外，第一個泛素分子也可與底物n末端氨基酸殘基連線。第二階段為蛋白酶體對底物的降解：
⑤底物泛素鏈與蛋白酶體19s的泛素受體相互作用，蛋白底物去摺疊，並通過蛋白酶體受體端裂隙進入20s核心顆料內部，被逐步降解；⑥在泛素c-端水解酶、脫泛素酶和寡肽酶的作用下，釋放出泛素分子（可再次參與迴圈）。
化能自養型微生物如何獲取能量
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