1樓：科普小星球
鹼裂解法的原理是：高ph 的溶液會使細胞壁粕類從而使得dna和蛋白質變性。
將細菌懸浮液暴露於高ph值的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體dna和蛋白質變性，將質粒dna釋放到上清中。
儘管鹼性溶劑使鹼基配對完全破壞，閉環的質粒dna雙鏈仍不會彼此分離，這因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。只要用鹼處理的強度和時間不要太過，當ph值恢復到中性時，dna雙鏈就會再次形成。
在裂解過程中，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體dna會相互纏繞成大型複合物，後者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用k+取代na+時，複合物會從溶液中有效地沉澱下來，離心除去變性劑後，就可以從上清中**復性的質粒dna。
在sds存在的條件下，鹼水解是一項非常靈活的技術，它對e. coli的所有菌株都適用，並且其細菌培養物的體積可以從1-500ml以上。
擴充套件資料
鹼裂解法適用於小量質粒dna的提取，提取的質粒dna可直接用於酶切、pcr擴增、銀染序列分析。方法如下：
1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞於2mllb培養基。
2、37℃振盪培養過夜。
3、取1.5ml菌體於ep管(離心管)，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4、加0.lml溶液i（1%葡萄糖，50mm/ledtaph8.0，25mm/ltris-hclph8.0）充分混合。
5、加入0.2ml溶液ii（0.2mm/lnaoh，1%sds），輕輕翻轉混勻，置於冰浴5min.
6、加入0.15m1預冷溶液iii（5mol/lkac，ph4.8），輕輕翻轉混勻，置於冰浴5min.
7、以10，000rpm離心20min，取上清液於另一新ep管
8、加入等體積的異戊醇，混勻後靜置10min.
9、以10，000rpm離心20min，棄上清。
10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次，抽乾所有液體。
11、待沉澱乾燥後，溶於50ulte緩衝液中（或60℃溫育去離子水）
2樓：匿名使用者
鹼裂解法是較常用的提取的方法。其優點是收穫率高，適於多數的菌株，所得產物經純化後可滿足多數的dna重組操作。
十二烷基磺進行質粒的小量製備。十二烷基磺酸鈉（sds）是一種陰離子表面活性劑，它既能使細菌細胞裂解，又能使一些蛋白質變性。用sds處理細菌後，會導致細菌細胞破裂，釋放出質粒dna和染色體dna，兩種dna在強鹼環境都會變性。
由於質粒和主染色體的拓撲結構不同，變性時前者雖然兩條鏈分離，卻仍然纏繞在一起不分開；但後者完全變性分甚至出現斷裂，因此，當加入ph4.8的酸性乙酸鉀降低溶液ph值，使溶液ph值恢復較低的近中性水平時，質粒的兩條小分子單鏈可迅速復性恢復雙鏈結構，但是主染色體dna則難以復性。在離心時，大部分主染色體與細胞碎片，雜質等纏繞一起被沉澱，而可溶性的質粒dna留在上清夜中。
再由異丙醇沉澱、乙醇洗滌，可得到純化的質粒dna。
鹼裂解法提取的質粒dna可直接用於酶切、pcr擴增、銀染序列分析等。
3樓：匿名使用者
鹼裂解法是提取質粒的最常用也最有效的方法，是基於染色體dna與質粒dna的變性與復性的差異達到分離目的。
原理：高ph使質粒dna和染色體dna變性，同時沉澱蛋白質。再將ph值調至中性，質粒dna較小，很容易復性成雙鏈。
而染色體dna較大，不會復性，纏結成網狀不溶物質，從而可以通過離心除去。
方法：依次加入下面三種溶液:
溶液1： 葡萄糖 50 mmol/l，edta 100 mmol/l，tris-cl 25 mmol/l,溶菌酶5mg/ml,ph 8.0
溶液2： naoh 0.2 mol/l，sds 1%
溶液3： 5 mol/l kac 60 ml，冰乙酸 11.5 ml，重蒸水 28.5 ml
其中溶液1作用主要是懸浮菌體，溶液2作用是裂解菌體，釋放胞內物質，溶液3是沉澱染色體dna
鹼裂解法大量提取質粒是什麼原理？
4樓：匿名使用者
1濃度過高無法正常電壓。2提取過程因為某些因素使dna降解
鹼法分離質粒dna的原理是什麼？
5樓：淘歌
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是鹼裂解法：當菌體在naoh和 sds溶液中裂解時，蛋白質與dna發生變性，當加入中和液後，質粒dna分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體dna不變性 而呈絮狀，離心時可沉澱下來。
進一步的質粒dna獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽提，rna酶消化和乙醇沉澱 等簡單步驟去除殘餘蛋白質和rna以及過多的鹽分，而試劑盒則在此基礎上使用dna吸附柱來吸附質粒dna，在洗脫得到質粒。
評價：1，可通過瓊脂糖電泳來檢查所獲質粒的大小（準確大小需酶切），有無細菌基因組dna和rna汙染，以及質粒的斷裂多少，同時也可根據marke量對樣品進行大致的濃度定量；
2，通過紫外分光光度計測定樣品od280和od260，計算其比值來衡量樣品的純度。經驗值：純dna：
od260/od280≈1.8(＞1.9,表明有rna汙染；＜1。
6，表明有蛋白質、酚等汙染）。同時，用紫外分光光度計對其進行精確濃度定量。
去除蛋白質：如上所言，提取質粒過程中，一部分蛋白質會在鹼裂解法中形成沉澱，得以去除；還有更多不能形成沉澱的蛋白質在用酚/氯仿/異戊醇進行抽提的過程中被去除。
若有疑問，歡迎繼續討論，祝愉快！
6樓：匿名使用者
強鹼可以破壞細菌壁，並且切斷細菌dna,在破壞質粒dna之前中和之後，細菌殘骸和切斷的dna會和表面活性劑形成沉澱，通過離心分離，質粒留存在上清溶液中。
為什麼真核dna無法用鹼裂解法提取
7樓：祝略光孤晴
dna在鹼性條件下氫鍵會斷裂，提取質粒的ph值大約是12吧，我也記不清了。在這種情況下氫鍵理所當然的會斷裂，當然磷酸與核糖間的化學鍵也會斷一些。
提取質粒一般用的是大腸肝菌。
大腸肝菌的質粒dna和染色dna都會發生上述情況，但由於質粒是環狀結構，雖然dna也會變性斷裂氫鍵，但螺旋結構卻基本不會被破壞，也就是兩條單鏈環還是絞在一起。而染色dna的兩條鏈卻分開了。然後降低ph，應該是降到5左右，我記不清楚了。
質粒的兩條鏈之間的氫鍵又會複合，而染色dna的兩條鏈卻不像質粒那般複合，眾多的染色dna會形成網狀結構，沉澱下來。從而得到質粒dna。
真核生物的dna為線狀的，也會象上面的那樣不能得到完整的dna。
8樓：伊玉花以念
鹼裂解法只能提取質粒，因為質粒是環形雙鏈比較好恢復，而基因組就無法復性了。
基因組dna只能用表面活性劑法。
9樓：修秋英希詩
因為真核細胞dna上有蛋白質結合，如果用鹼裂解法就會把dna與蛋白質一起沉澱下去，無法分離出細胞核dna！
鹼裂解法提取質粒dna，原理是細胞內蛋白質在沉澱的過程中會把大的dna分子一起沉澱下去，質粒dna由於較小，不會被沉澱而進入上清液，因而可以通過離心將其分離出來！
然而真核dna與組蛋白緊密結合，無法用鹼裂解法提取出來！