擴增獲得酶的編碼基因後，應該如何進行序列分析和選擇表達載

1樓：此時情緒

序列測定可以交給測序公司做，又便宜又省事。

表達載體選擇原則：

（1）構建的質粒克隆載體應該是能在轉化的受體細胞中進行有效的複製，並且作為質粒克隆載體，希望在受體細胞中有較多的拷貝數。為此，構建的質粒克隆載體必須含有能在受體細胞內有效複製的質粒複製起始位點（ori），最好是鬆弛型質粒的複製起始位點。

（2）構建的質粒克隆載體必須含有允許外源dn**段克隆的位點，並且這樣的克隆位點應儘可能多。作為克隆位點的限制性核酸內切酶的識別序列一般在質粒克隆載體上只有一個。

（3）構建的質粒克隆載體必須含有供選擇克隆子的標記基因。一個質粒克隆載體最好有兩種選擇標記基因，並且在選擇標記基因區內有合適的克隆位點。當外源dn**段插入克隆位點後，標記基因失活，成為選擇克隆子的依據。

常用的選擇標記基因，主要有根據克隆子抗藥性提高進行篩選的apr或ampr 、cmr或cmpr 、kmr或karnr 、smr 或strr、tcr 或tetr等抗性基因；有根據克隆子藍白顏色進行篩選的lacz'基因。

（4）構建的質粒克隆載體dna分子應儘可能的小。由於質粒轉化受體細胞的效率同質粒dna分子大小相關，小分子質粒的轉化效率高，大於15kb的質粒轉化效率明顯下降。質粒克隆載體dna分子小，意味著可承載較大的外源dn**段。

2樓：匿名使用者

測序一般是要測序公司測的，很方便的

你表達的是一個原核生物的酶基因，一般採用是原核表達，但是你的基因要是很大的話，就要考慮用真核表達，一般原核表達很多都是採用pet系列的表達載體，因為本身pet系列的表達載體加的是his標籤，比較小，純化時比較方便，並且對酶活性影響小。

獲得一個功能未知的基因克隆後，怎樣才能闡明該基因的

高中生物選修3複習內容。

3樓：百度文庫精選

內容來自使用者:xuning4dg

4樓：不變的約定

1基因工程

2動物（動物細胞培養，核移植動物克隆，單克隆抗體）3植物（植物組織培養，動物體細胞雜交技術）4胚胎工程（體外受精，胚胎早期培養，胚胎移植，胚胎分割）其中一定注意胚胎分割要在桑葚胚或囊胚，還有內細胞團一定要平均分割。

5樓：安凱

呵呵呵，別想了，把書上內容看的滾瓜爛熟肯定考得好

用原核載體克隆並表達一種生物中的某個基因(序列已知),這種生物若是一種原核生物,應如何設計實驗?

某一同學克隆了一個基因的編碼cdna序列，為了研究其性質，欲構建其表達重組質粒，請你為他列出一個實驗方案 5

6樓：匿名使用者

1.根據實驗需要選擇合適的表達載體。

要考慮的問題：

使用什麼樣的啟動子？要不要與報告基因組成融合蛋白？有沒有純化蛋白的考慮？

2.根據表達載體的多克隆位點選擇合適的限制性內切酶位點，確保cdna序列中沒有這些位點。

3.設計帶有這些酶切位點的pcr引物，以cdna為模板，擴增其編碼序列（從起始密碼子到終止密碼子的部分）

需要絕對注意的問題：如需表達融合蛋白，切記不能讓插入片段（報告基因在前）或插入片段以後（報告基因在後）的序列發生移碼。可通過在引物上新增補齊鹼基來解決。

其它需要注意的：引物5『端至少加3個保護鹼基，否則下一步無法進行。

4.pcr產物和載體質粒同時用對應限制性內切酶進行切割，**酶切產物。

5.插入片段和線性化載體按3：1的比例，使用t4dna連線酶進行連線。4度過夜。

6.連線產物轉化大腸桿菌，塗對應抗生素lb平板。37度培養過夜後，挑取單克隆菌落接入少量含抗生素的lb培養基，37度搖床上培養過夜。

7.收集菌液中的菌體，抽提質粒。得到的質粒用同上的內切酶進行酶切，酶切產物跑瓊脂糖電泳進行鑑定，能切出大小符合要求的條帶者保留。

8.將保留的質粒測序，插入片段與原cdna序列相比無突變者即需要的重組質粒，可進一步擴大培養。

7樓：匿名使用者

你要告訴大眾，你的基因功能如何，然後是什麼物種，適合什麼轉基因方法，然後通過轉基因驗證其功能。

基因文庫構建的過程、原理及方法