植物組織培養過程中造成汙染的原因有哪些

時間 2022-03-09 16:15:03

1樓:

汙染的**。植物組培汙染主要是黴菌、細菌和酵母菌引起的汙染。黴菌和酵母菌在培養條件下生長快,很容易觀察到,而細菌潛伏期長,植物組織一般不表現症狀,所以很難在前期和肉眼觀察到[1]。

國外有關學者認為細菌汙染的**主要有三個:一是材料內部滅菌處理不好,這樣造成的汙染佔汙染總數的1/3~1/2。二是在正常的滅菌的條件下,內生菌能夠存活,這樣的汙染佔汙染源的1/4。

三是來自寄生植物的汙染佔1/4~1/2。同時認為有些植物的昆蟲和蟎蟲的體表帶有黴菌的孢子和細菌,在

九、十月份是重要的汙染源,因多種植物昆蟲處在大量繁殖階段,此時大量昆蟲造成的汙染源最易造成組培汙染的嚴重發生。近六年來,我們通過對獼猴桃、櫻桃、託柄菝葜及大花非洲菊初級培養汙染的研究中發現,高溫、多雨的環境更有利於汙染的發生,而且隨著植物材料年齡的增長,植物材料的健康狀況不斷惡化,組培汙染也會更加嚴重。另外,外植體的狀況,環境條件和操作過程也是引起汙染的主要原因。

由於培養的植物材料大都採集于田間栽培植株,材料上常附有各種微生物,一旦被帶入培養基,即會迅速繁殖滋長,造成汙染,培養失敗。所以培養前必須對外植體進行嚴格的消毒處理,消毒的尺度為既能全都殺滅外植體上附帶的微生物,但又不傷害材料的生活力。因此,必須正確選擇消毒劑和使用的濃度、處理時間及程式。

目前,常用的消毒劑有次氯酸鈣、氯化汞、次氯酸鈉、雙氧水、酒精(70%)等。具體消毒方法如下:

(1)莖尖、莖、葉片的消毒消毒前先用清水漂洗乾淨或用軟毛刷將塵埃刷除,茸毛較多的用皁液洗滌,然後再用清水洗去皁液,洗後用吸水紙吸乾表面水分,用70%酒精浸數秒鐘,取出後及時用10%次氯酸鈣飽和上清液浸泡10~20分鐘。或用2%~10%次氯酸鈉溶液浸泡6~15分鐘。消毒後用無菌水沖洗3次,用無菌紗布或無菌紙吸乾接種。

(2)根、塊莖、鱗莖的消毒這類材料大都生長在土中,常帶有泥土,挖取時易遭損傷。消毒前必須先用淨水清洗乾淨,在凹凸不平處以及鱗片縫隙處,均用毛筆或軟刷將汙物清除乾淨,用吸水紙吸乾後,在70%酒精中浸一下,然後用6%~10%次氯酸鈉溶液浸5~15分鐘,或用0.1%~0.2%氯化汞消毒5~10分鐘,最後用無菌水清洗3~4次,用無菌紗布或無菌紙吸乾後接種。

(3)果實、種子的消毒這類材料有的表皮上具有茸毛或蠟質,消毒前先用70%酒精浸泡幾秒鐘或2~10分鐘,然後用飽和漂白粉上清液消毒10~30分鐘或2%次氯酸鈉溶液浸10~20分鐘,消毒後去除果皮,取出內部組織或種子接種。直接用種子或果實消毒,經消毒後的材料均須用無菌水多次沖洗後接種。

(4)花葯、花粉的消毒植物的花葯外面常被花瓣、花萼包裹著,一般處於無菌狀態,只需採用表面消毒即可接種。通常先用70%酒精棉球擦拭花蕾或葉鞘,然後將花蕾剝出,在飽和漂白粉上清液中浸泡10~15分鐘,用無菌水沖洗2~3次,吸乾後即可接種。

植物組織培養中哪些因素可導致汙染的發生

2樓:帝都小女子

汙染原因1.1

外植體①年齡、種類和大小。成年植株帶菌多;生理年齡老的材料帶菌多;雜菌和內生菌多的外植體、有病蟲害的植株,均易汙染;室外生長的材料帶菌多;表面有泥土的材料、地下器官均帶菌多;表面積大的材料比表面積小的材料帶菌多[1-2]。

②取材時期和部位。雨季菌類繁殖旺盛,此時材料帶菌多;陽光最強時紫外線較強,殺菌效果好,此時材料帶菌較少;選取了不清潔、生長不旺盛部位的材料帶菌多[1]。

③滅菌效果。外植體滅菌是組織培養的關鍵,滅菌效果直接決定了組織培養的成敗,滅菌方法和滅菌劑處理不當導致滅菌效果差,使外植體帶菌。1.2

組織培養過程中各技術環節操作不規範①培養基。使用長菌的母液配製培養基;培養

基ph值高、新增的有機成分均可導致細菌汙染;培養基分裝好後沒有及時封口或封口後沒有立即滅菌;培養容器口沒有封嚴導致滅菌後細菌和真菌孢子再次進入培養容器使培養基汙染;封口用的塑料蓋、封口膜長時間在日光燈照射下易老化、破裂,導致密封性差,不慎使用後可能導致培養基汙染;橡皮筋長時間在日光燈照射下也易鬆動、斷裂,雜菌可能趁機進入培養容器;滅菌方法不當導致培養基汙染;滅菌時間過短導致培養基滅菌不徹底;滅菌時間達到後立即開啟滅菌鍋,導致容器內壓力差過大,使外部雜菌有可能被倒吸入容器中[1];過濾較多溶液後,濾膜過濾效果較差,使過濾後的溶液有菌,加入培養基後造成汙染。

②培養容器和接種器具。培養容器不清潔;培養容器被汙染後滅菌不徹底,再次使用時導致汙染;高壓滅菌鍋或烘箱內培養容器、接種器具裝得過滿,影響滅菌效果;培養容器、接種器具滅菌時間過短導致滅菌不徹底;滅菌結束後立即開啟高壓滅菌鍋或烘箱,強烈的冷熱對流會導致冷空氣被吸入包紮層內而重新造成汙染帶菌[1]。

③接種人員。過長指甲;雙手未清洗乾淨;衣服和頭髮有很多灰塵,接種時不換拖鞋、接種服、帽子和口罩;不慎將已汙染的培養材料拿入超淨工作臺,轉接後再次汙染;培養容器中接種的培養物過多;超淨工作臺上物品擺放過多、過高使氣流被擋住,導致滅菌效果差;接種時說話或咳嗽會撥出大量細菌;操作時手超出工作臺面;手接觸培養容器邊緣,放在器皿、接種器械上方致使微生物落入培養容器中;開啟培養容器的塞子、蓋或封口膜時空氣進入帶來灰塵;接種過程中器械被手或帶菌材料汙染後未經消毒,再次使用後又汙染了材料;沒有在超淨工作臺下風方向操作而使菌類隨風飄落到容器中[3];中途離開超淨工作臺後馬上又繼續接種,將培養基、器械等物品拿入超淨工作臺繼續接種而帶入灰塵,順風飄入器皿。服裝、帽子、口罩、拖鞋長期穿戴後較髒,表面有大量灰塵,未經清洗反覆穿戴後造成汙染。

④接種室和培養室。人員的進出導致接種室和培養室空氣中存在大量細菌和真菌,尤其是接種過程中非工作人員的進出;接種室設計不合理,造成室內灰塵、細菌過多;超淨工作臺置於灰塵太多的地方,過濾裝置使用過久、保養不當造成失效;組培室、接種室門窗封閉不嚴,蒼蠅等趁機飛入,利於雜菌傳播;培養室面積大易汙染,室內溫度高、空氣溼度大,菌類繁殖旺盛也會加重汙染

在植物組織培養中,哪些因素可導致汙染的發生

3樓:匿名使用者

一,外植體沒處理乾淨造成汙染

二,汙染的培養皿沒有處理好造成二次汙染

三,鑷子手術刀等工具汙染,培養基沒滅菌,工作臺沒滅菌四,接種時沒有靠近火焰瓶口掉落的菌,操作不熟練增加汙染率五,實驗員說話打鬧,工作密集

六,實驗室大規模汙染

在植物組織培養中,造成組培材料汙染的因素都有哪些

4樓:從南風

材料除菌不徹底

培養基滅菌不徹底

容器滅菌不徹底

操作不規範

接種完成後沒密封好

怎樣預防植物組織培養中的汙染

為什麼要選擇**植物組織培養汙染的原因及解決措施這個題目?**答辯

5樓:

在植物組織培養過程中,用到富含營養物質的培養基,這是培養物得以生長。但在培養過程中,由於外植體帶菌、培養瓶和各種器械面均不徹底、操作人員操作不規範等原因,使得許多雜菌進入培養基中,並在上面迅速生長。雜菌的生長一方面會與目標培養物競爭營養,從而使其失去營養;另一方面會產生大量對目標培養物有害的物質,導致其不能正常生長甚至死亡。

所以要強調所用器械的緬軍和實驗人員的無菌操作。

植物愈傷組織培養幾種汙染現象

6樓:8605800的樓主

通常為真菌汙染和細菌汙染。原因有很多,培養基滅菌不徹底,操作過程有誤,外植體消毒不徹底、所培養的周邊環境不乾淨都有可能造成汙染。

7樓:匿名使用者

植物組織培養過程中汙染一般有幾種情況:1.培養基滅菌不徹底導致,這種汙染一般情況下都是黴菌汙染。

2.外植體消毒不徹底導致的汙染,這種汙染一般在會出現黴菌,細菌汙染。3.

外植體體內病毒汙染,這種汙染沒辦法控制,需要採用莖尖脫毒等方法進行脫毒處理。4.操作不當汙染,這種情況大多數都是屬於細菌型別汙染。

8樓:蓮見雪枝

1.微生物汙染:表現為細菌或真菌的各種菌落或菌絲體,多數由接種材料或接種操作引起;

2.代謝物汙染引起:表現為愈傷組織褐化、變黑、自溶等,多由酚類物質氧化物、乙烯、乙醇等物質引起。

9樓:徵龍

1,黴菌汙染,

2.細菌汙染

3.病毒汙染

對於植物組織培養過程**現的真菌汙染,有什麼有效的防治措施

10樓:匿名使用者

一開始的時候培養器皿沒有消毒,之後培養的組織也沒有經過一定的消毒,最後還有可能就是隔離做得不好,培養組織被真菌汙染了

關於植物組織培養,植物組織培養的流程

加蔗糖是提供能源物質,這個生長素都是低濃度的,都是適合根的生長的,還沒達到抑制的那個濃度 加蔗糖的原因有兩個 一是給植物細胞所需要的營養,植物細胞可以產生分解蔗糖的酶,使蔗糖變成利於吸收的單糖 是蔗糖工業提取比較廉價,方便工廠化的組織培養.植物組織培養的流程 植物組織培養可以分為四個階段 1 建立無...

植物組織培養過程中細胞的全能性有沒有發生改變

我的個人理解,不知是否正確.希望可以幫到你啊.植物細胞全能性 totipotency 指植物的每個細胞都包含著該物種的全部遺傳資訊,從而具備發育成完整植株的遺傳能力。在適宜條件下,任何一個細胞都可以發育成一個新個體。植物細胞全能性是植物組織培養的理論基礎。我的理解 1 每個細胞都包含著該物種的全部遺...

在植物組織培養過程中為什麼要進行一系列

邊翠桃漫展 首先注意兩個詞 滅菌 和 消毒 很明顯,前者要求比後者嚴格的多。作為植物組織培養,要求非常嚴格的無菌環境,只要沾上極少量菌體或者芽孢就有可能造成培養失敗。而且,不僅是細菌可以汙染,真菌同樣會造成汙染。所以植物組織培養過程中大部分用的是 滅菌 而非 消毒 如果滅菌不徹底,培養過程中存在汙染...