1樓:匿名使用者
各個不同的離心機同樣的離心力下轉速可能會有差異。各個組織的不同細胞可能又適合不同的離心力。所以原代細胞培養時離心的轉速最好是根據離心力來換算,具體細胞組織具體調整,正常離心的離心力最好是100g到200g,換算後的轉速一般是1000rpm每分鐘到2000rpm每分鐘,一共離心5分鐘。
離心細胞的效果比較好,對細胞的損傷都比較小。
2樓:匿名使用者
一、實驗前準備工作:
1、培養瓶的包被:包被液如多聚賴氨酸(pll,sciencell品牌,貨號0403或0413)或纖維粘連蛋白(bpf,sciencell品牌,貨號8248),以無菌水稀釋至2 ug/cm2的濃度包被培養瓶。37度孵箱1小時或4度過夜,從包被好的培養瓶中**多聚賴氨酸,並用無菌水洗滌培養瓶2遍。
包被好的培養瓶不要放置超過24小時,其中的包被液可吸出重複使用2-3次,注意不要汙染。
2、完全培養基的配置:以內皮細胞培養基(ecm,sciencell品牌,貨號1001)為例,把配套的胎牛血清(fbs,sciencell品牌,貨號0025)、生長因子(ecgs,sciencell品牌,貨號1052)和雙抗(p/s,sciencell品牌,貨號0503)加入基礎培養液(ecm,sciencell品牌,貨號1001)中。重新貼好標籤,並混勻培養基。
二、原代細胞復甦方法:
1、從液氮中取出原代細胞冷凍管,迅速投入37~38 ℃水浴中,其間可以輕輕轉動細胞,加快融化速度,大約需要1分鐘時間。
2、5分鐘內用培養基稀釋至原體積的10倍以上,加入培養瓶中,再用1ml培養基洗滌細胞凍存管,保證細胞都被加入培養瓶中,靜置於孵箱,12-16小時後更換培養基(除去dmso)。以後每2天換一次液,保證細胞狀態良好。
三、原代細胞傳代方法:酶消化法
當細胞生長至70-80%左右可以傳代,傳代比例以1:2或1:3為佳。具體方法如下:
1、棄去培養瓶中培養基,用pbs洗滌培養瓶2遍,加入0.25%的胰酶消化液(trypsin-edta,sciencell品牌,貨號0103),以消化液能覆蓋整個瓶底為準。37度孵育4分鐘左右,輕拍培養瓶側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況,直到80%細胞呈現圓形。
2、細胞消化好後,加入胰酶中和液(tns,sciencell品牌,貨號0113),並輕輕搖動培養瓶,形成細胞懸液,然後將細胞和培養基轉移至離心管中,1000rpm離心5分鐘。
3、棄去上清液,以1-2ml新鮮培養基重新懸浮細胞並吹打均勻,接種於包被好的新培養瓶中,瓶中已有10ml左右的培養基,放入培養箱中培養,每2天更換培養基。
3樓:
原代細胞最好1500rpm,最高別過3000,具體要看細胞,像神經細胞1000就行了
4樓:北京裕恆豐科技
一般原代細胞 1000rpm離心5分鐘
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