1樓：魯賢洪子
實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同，是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料（sybr
green
或taqman
探針等等）。以sybr
green為例，這種染料可以結合在雙鏈的dna上，當pcr不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈dna也在增加，熒光染料結合也越多，熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭，可以定量檢測熒光的強度，轉換成數值。這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢，因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr，同樣**也高一些。
2樓：奈金蘭郝儀
間隔也很小，都在0.4左右-----估計你沒有擴出目的dn**段，檢測到的訊號都是引物二聚體跟sybr結合的結果。
我懷疑你的pcr條件還沒調整至最佳條件。你先用濃度最大的那個質粒做模板，進行定性pcr，然後跑電泳，觀察是否有目的條帶，是否有引物二聚體。記住，有引物二聚體的話，引物二聚體就會和sybr結合，這樣做realtimepcr是不準的。
一定要調整至沒有引物二聚體，可以考慮提高退火溫度及降低引物濃度。
調整好之後，質粒用pcr水做10倍梯度稀釋（比如4微升稀釋至40微升），如果擴增效率沒問題的話，理論上質粒濃度每差10倍，其ct值就相差3.3。另外，如果體系調整好之後，你的質粒最小的還是在26以上的話，最低只能稀釋到100倍了，再低就做不出來了
3樓：止玉花奚珍
恆溫pcr主要是，確定是否存在一段特異的dna序列。
但是熒光定量pcr是看溶液中特異的pcr序列的濃度。
兩者沒有什麼優勢。一般的可能就是功能簡單但是便宜。主要是便宜熒光的很貴
很貴不是一般的貴！！
實時熒光pcr方法靈敏度略高於恆溫pcr，但儀器昂貴，試劑消耗也相對更貴，適合向高階客戶推廣；恆溫pcr大部分效能與實時熒光pcr相對，靈敏度稍低於實時熒光pcr，但儀器價效比高，更利於推廣。實際推廣中對高階客戶可以採取用恆溫pcr作為契機，在交流中如客戶對靈敏度有高要求而又有一定實力的可推薦使用實時熒光pcr產品。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr這兩種有什麼區別？哪個更有優勢？
4樓：最純粹的自由
實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同，是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料（sybr green 或taqman 探針等等）。以sybr green為例，這種染料可以結合在雙鏈的dna上，當pcr不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈dna也在增加，熒光染料結合也越多，熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭，可以定量檢測熒光的強度，轉換成數值。
這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢，因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr，同樣**也高一些。
5樓：傅浩川
恆溫pcr主要是，確定是否存在一段特異的dna序列。
但是熒光定量pcr是看溶液中特異的pcr序列的濃度。
兩者沒有什麼優勢。一般的可能就是功能簡單但是便宜。主要是便宜熒光的很貴 很貴 不是一般的貴！！
實時熒光pcr方法靈敏度略高於恆溫pcr，但儀器昂貴，試劑消耗也相對更貴，適合向高階客戶推廣；恆溫pcr大部分效能與實時熒光pcr相對，靈敏度稍低於實時熒光pcr，但儀器價效比高，更利於推廣。實際推廣中對高階客戶可以採取用恆溫pcr作為契機，在交流中如客戶對靈敏度有高要求而又有一定實力的可推薦使用實時熒光pcr產品。
6樓：匿名使用者
實時熒光pcr方法靈敏度略高於恆溫pcr，但儀器昂貴，試劑消耗也相對更貴，適合向高階客戶推廣；恆溫pcr大部分效能與實時熒光pcr相對，靈敏度稍低於實時熒光pcr，但儀器價效比高，更利於推廣。實際推廣中對高階客戶可以採取用恆溫pcr作為契機，在交流中如客戶對靈敏度有高要求而又有一定實力的可推薦使用實時熒光pcr產品。
pcr和實時熒光定量pcr這兩種有什麼區別
7樓：
原理不同：熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量,一般是紫外光.
反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段.如果不需要檢測產物分子量大小,熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析,普通pcr必須電泳.
結果：熒光定量可以實現精確定量,普通pcr則不行.熒光定量體現可以看到整個擴增過程,可以看到擴增效率,溶解溫度,直接得到的標準曲線等,這些是普通pcr無法實現的.
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛,希望可以幫到你
8樓：汗耕順閔凰
熒光原位雜交和熒光定量pcr有什麼區別
實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同，是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料（sybr
green
或taqman
探針等等）。以sybr
green為例，這種染料可以結合在雙鏈的dna上，當pcr不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈dna也在增加，熒光染料結合也越多，熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭，可以定量檢測熒光的強度，轉換成數值。這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢，因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr，同樣**也高一些。
實時熒光定量pcr與基本pcr相比有什麼優點
9樓：杏雀烈
熒光定量pcr與普通pcr相比具有以下優點：
1、高靈敏性 可檢測單個細胞基因；
2、高特異
10樓：匿名使用者
普通的pcr大多數是定性實驗，而實時熒光定量pcr則定量和定性都可以做。應用領域也不一樣，普通pcr一般應用於基因組克隆、dna測序、rna反轉錄等，而實時熒光定量pcr一般應用於mrna表達量分析、絕對定量、蛋白表達、snp分析、陰陽性解析等領域。不是定量pcr比pcr好，而是兩者應用與不同的領域，起到了不同的作用。
熒光定量pcr較普通pcr不同的一點就是可以實時檢測pcr擴增產物，從而可進行絕對定量或者相對定量。
11樓：奔馬的香香豬
pcr實驗主要採用sybr green染料法和taqman探針法，biog技術採用經化學修飾的熱啟動聚合酶，有效避免了非特異擴增，具有高度的特異性。反應緩衝液經多次優化，與熱啟動聚合酶具有最為樂觀的搭配，使聚合酶的活效能夠得到最大程度的發揮。反應靈敏快速，40個迴圈只需20多分鐘的時間。
在20ul的反應體系裡，只要有幾個拷貝的dna分子就能被檢測出來。
實時熒光定量pcr與普通pcr的區別是什麼？結果有何異同？能說明的問題是什麼？
12樓：麼破1自我
二者結果相同。都能說明生物體外的特殊dna複製的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。
區別：1、二者系統組成不同
熒光定量pcr儀比普通的pcr儀多了熒光訊號採集系統和計算機分析處理系統。
2、二者原理不同
熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光，普通ocr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量。
3、二者反應要求不同
熒光定量pcr對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通pcr可以擴增長點的片段。
4、二者應用不同
熒光定量pcr主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的，普通的pcr儀是做定性分析和擴增基因片段，定量pcr儀可以做普通pcr儀的工作，反之不行。
5、二者測量成本不同
定量pcr儀**較為昂貴，普通的基因擴增儀(pcr儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是**要低很多，而且執行成本也要低很多。
實時熒光定量pcr技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的侷限，實現了每一輪迴圈均檢測一次熒光訊號的強度，並記錄在電腦軟體之中，通過對每個樣品ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。
13樓：匿名使用者
原理不同：熒光定量pcr實時監
測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量，一般是紫外光。
反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段。如果不需要檢測產物分子量大小，熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析，普通pcr必須電泳。
結果：熒光定量可以實現精確定量，普通pcr則不行。熒光定量體現可以看到整個擴增過程，可以看到擴增效率，溶解溫度，直接得到的標準曲線等，這些是普通pcr無法實現的。
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛，希望可以幫到你
14樓：匿名使用者
所謂實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行「定量分析」的方法。
記住，實時熒光定量是定量分析
15樓：匿名使用者
熒光pcr是為了測量mrna表達量的 普通pcr是為了擴增目的片段的
16樓：匿名使用者
熒光定量是定量的，普通pcr是定性的，結果一個是說明含有多少，另一個說明有還是沒有，前者更精確一點
實時熒光定量pcr和定量pcr有什麼區別
17樓：殷秀梅森煙
完全兩個不同的概念，梯度pcr是指你的pcr儀在設定的時候可以同一時間不同位置設定一個從高到低的溫度梯度，以便在不知道退火溫度的情況下選擇一個最適宜的退火溫度。二實時熒光定量pcr是通過再pcr過程中摻入熒光染料或釋放熒光基團，從而對模板進行相對定量或絕對定量的實驗，在實時熒光定量pcr時也可以設定梯度，總的來說實時熒光定量pcr是一種實驗方法，而梯度pcr是一種實驗手段
實時熒光定量PCR儀國產有哪些,價格及相關技術引數
東林的觸屏pcr儀不錯，新品上市，8英寸高解析度觸控式螢幕 具有高度靈活性，多種模組容量選擇，滿足多種實驗需求。到鼎國生物瞭解諮詢吧。 biosaferpcr儀引數參考 1 樣品臺 標準模組 96 0.2ml 77 0.5ml混合模組 可另選384well模組a 96 0.2ml模組b 54 0.5...
實時定量PCR縱座標log2 fold 是什麼意思
是一樣的，所謂的實時就是在儀器上可以隨時觀察pcr產物的擴增的情況。一般也叫實時定量pcr 魔界雲影 因為dna是半保留複製的,所以其數量的增長必然是類似於以時間為自變數以2為底的指數函式 log2 fold 就是以2為底的對數函式至於fold可能是指 一半 的意思 我沒學過.以上只是合理的演繹邏輯...
熒光定量pcr的擴增效率e多少算好
鮑希榮鞠嫣 擴增效率理論上不可能超過2。計算值超過2，可能是因為pcr效率不高或者不穩定，結果線性度差，導致某個區間的資料點計算出來的擴增效率反而大於2.這樣的標準曲線如果作圖的話，資料點都不在一條直線上。一般都是試劑擴增效率有問題，離子濃度不對，或者酶比較劣質。也有可能是引物不好。可以先換一對已知...