1樓:
細胞汙染很多種,不同種細胞汙染表現不同,可能檢測方法不同。不過大部分汙染用肉眼加鏡檢就可以解決。
細胞汙染一般分細菌汙染,真菌汙染,支原體汙染,黑膠蟲等。
細菌汙染:ph升高培養基變黃,培養基嚴重渾濁,鏡下可見細菌遊動;
真菌汙染:培養液短期內多不渾濁,有肉眼可見漂浮物,鏡下細胞間有菌絲體,生長變慢,時間長細胞死亡;
支原體汙染:細胞生長一般無可見變化,可用支原體檢測試劑盒檢測支原體汙染(現在市場上有賣,有檢測支原體dna的,靈敏度高但過程複雜;非檢測dna的過程簡單)
黑膠蟲:培養液不渾濁,細胞生長影響不大,鏡下有小黑點做布朗運動;
2樓:匿名使用者
1 細胞培養技術
細胞培養技術是一種體外增殖細胞的常規實驗技術,目前被廣泛用於教學、科研和臨床實驗。細胞培養過程中最大的威脅就是細胞汙染,凡是混入細胞培養環境中,細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應視為汙染。汙染控制是細胞培養能否成功的關鍵所在。
引起培養細胞汙染的微生物有細菌、真菌、黑膠蟲、支原體等,及時檢測並鑑定出所培養的細胞是否被汙染至關重要。
2 細菌真菌汙染及檢測方法
菌和真菌汙染是最常見的兩類細胞汙染型別。其中,常見的細菌汙染有枯草桿菌,大腸桿菌,假單胞菌,白色葡萄球菌等,常見的真菌汙染有煙麴黴,黑麴黴,毛黴菌,白色念珠菌和酵母菌等。檢測方法:
通過觀察培養基的顏色、漂浮物、p h值或在顯微鏡下觀察細胞及其生長狀態,從而能初步判斷該細胞是否受細菌、真菌汙染。細菌汙染會導致培養基出現渾濁、顏色改變以及p h值急劇變化, 受汙染的貼壁細胞在幾天內會逐漸脫壁死亡。真菌汙染後的細胞生長速度變慢, 培養基中會漂浮白色、淺黃色或黑色的小點。
3 支原體汙染
許多調查及研究顯示,世界範圍內正在使用的細胞體系中支原體汙染發生率達30% ~60%,汙染細胞的支原體主要有人源、豬源和牛源三類。支原體汙染會影響細胞的形態、功能、代謝、細胞膜、生長速率、誘導染色體畸變、細胞內訊號傳導等各種細胞特性。受支原體汙染的細胞在培養時培養基的p h值不會發生改變, 也不會渾濁, 因此, 很難直接觀察出細胞是否受到汙染。
4 常用的支原體檢測方法
有培養法、dna熒光染色法、酶聯免疫吸附法和pcr法,熒光定量pcr法,恆溫熒光等。dna熒光染色法是用hoechst33342對細胞進行染色,熒光染色法檢測支原體汙染,就是利用 hoechst 33342 可與雙鏈 dna 結合,在紫外光的激發下,釋放強烈的藍色熒光這一特點對細胞加以染色。經過染色,在熒光顯微鏡下,可見細胞周圍或細胞膜上有大小不等、不規則熒光著色顆粒,為支原體汙染細胞,此種方法容易出現假陽性,需要用pcr法進一步檢測。
通過支原體通用引物對細胞進行pcr擴增,利用瓊脂糖凝膠電泳進行檢測, 通過比對分析擴增產物的大小, 可進行支原體感染的鑑定。蘇州先達基因獨家專利產品支原體檢測試劑盒,利用恆溫擴增熒光檢測,提供了一種快速簡單靈敏的細胞支原體檢測方法,能檢測的支原體種類超過130(亞)種。兩步操作,20min出結果。
5細胞交叉汙染
同一個細胞培養室培養不同種類的細胞,因貼錯標籤,取錯細胞就有可能出現細胞間交叉汙染。確保實驗用的細胞是單一且正確的細胞很重要。常見的細胞鑑定法有同工酶圖譜分析法、人類白細胞抗原分型法和短串聯重複序列str圖譜分析法。
細胞培養過程中的上述汙染源可能有環境、實驗試劑耗材、空氣等,在細胞培養的任何一個環節,都需要保持無菌操作意識,防止細胞汙染。因此, 規範實驗操作、避免連續使用抗生素、拒絕「免費」細胞、從規範的細胞庫購買細胞等各種方法都有助於減少實驗室中的細胞汙染。
細胞被細菌汙染,怎麼辦
3樓:芥末留學
你想知bai
道是哪種細菌我無能為力。du不過有些事情可zhi以建議你。
首先dao
,41℃不知道內是你**的出來的滅菌方式容,要滅菌都是121℃下20分鐘以上才行。
要分析**汙染可以按照步驟來,首先,考慮培養基。取樣培養基,在37°培養箱中做無菌試驗,看看培養基有問題沒。接著,換一批培養瓶,槍頭。
因為我不知道你的實驗條件怎麼樣,比如說槍頭是滅菌的還是一次性包裝中的吸量管,使用的方瓶是反覆滅菌的玻璃方瓶還是一次性塑料方瓶。用的是生物安全櫃還是超淨臺等等。這些都是有區別的。
我猜你染這種菌,應該是用的超淨臺,玻璃方瓶,以及滅菌的槍頭是吧。
4樓:時光如梭
如果不bai是十分珍貴的細胞,建議du丟棄,從新培養。
zhi如果是十分dao難得,珍貴版的細胞,需權要挽救的話,建議分別配置含10倍雙抗的pbs和5倍雙抗的完全培養基各一份。
然後先用10倍雙抗的pbs洗滌細胞5-10次。
然後用5倍雙抗的完全培養洗滌細胞3次以上,並在其後每培養1小時換液一次,最後2倍雙抗培養基培養過夜,第二天換成一倍雙抗完全培養基繼續培養,傳代一次以上,如未發現汙染,即可凍存,並留出部分細胞繼續採用無雙抗培養基培養48小時以上,最終確定細胞不含有任何汙染物。
5樓:知識海洋
ip害怕很厲害豐年蟲,夫君都沒比
6樓:匿名使用者
可以考bai慮用一下
bacteria™ rid細胞du汙染除菌劑,主要用於清zhi除細胞、血清、培
dao養基中的常見細菌汙回染,特
答別對一些耐藥細菌有非常好的殺菌作用,針對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、腦膜炎球菌、白喉桿菌、綠濃桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、卡他球菌等都有較強的殺菌作用。細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。新一代中藥提取物製劑,只需3次左右就可以清除細胞中的耐藥細菌類的汙染。
解決方法:
a. 發現細胞有耐藥細菌類汙染,棄掉培養基,用pbs清洗3-5遍;
b. 然後按1:1000 比例加入bacteria™ rid 試劑,即:邊加邊搖勻;
c. 每天處理一次,bacteria™ rid 連續處理3-5天,即可完全清除細菌汙染。
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