流式細胞儀的工作原理是什麼

時間 2021-05-07 20:00:14

1樓:緋攻

流式細胞儀主要由四部分組成:流動室和液流系統,鐳射源和光學系統,光電管和檢測系統,計算機和分析系統。四大系統共同完成訊號的產生、轉換和傳輸任務。

檢測時將待測細胞或微粒製成細胞懸液,進行熒光染色後加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓**動室,在高壓下磷酸緩衝液(鞘 液)從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形流束(鞘流),待測細胞在鞘液包繞下單行排列,依次通過檢測區。流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。

經過聚焦後的光束,垂直照射在樣品流上,當細胞攜帶熒光素標記物通過鐳射照射區時,產生代表細胞內部不同物質、不同波長的熒光訊號,這些訊號以細胞為中心向空間360o 立體角發射,產生散射光和熒光訊號。

2樓:小美

流式細胞儀可同時進行多引數測量,資訊主要來自特異性熒光訊號及非熒光散射訊號。測量是在測量區進行的,所謂測量區就是照射鐳射束和噴出噴孔的液流束垂直相交點。液流**的單個細胞通過測量區時,受到鐳射照射會向立體角為2π的整個空間散射光線,散射光的波長和入射光的波長相同。

散射光的強度及其空間分佈與細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構密切相關,因為這些生物學引數又和細胞對光線的反射、折射等光學特性有關。未遭受任何損壞的細胞對光線都具有特徵性的散射,因此可利用不同的散射光訊號對不經染色活細胞進行分析和分選。經過固定的和染色處理的細胞由於光學性質的改變,其散射光訊號當然不同於活細胞。

散射光不僅與作為散射中心的細胞的引數相關,還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關。在流式細胞術測量中,常用的是兩種散射方向的散射光測量:

①前向角(即0角)散射(fsc);

②側向散射(ssc),又稱90角散射。這時所說的角度指的是鐳射束照射方向與收集散射光訊號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。一般說來,前向角散射光的強度與細胞的大小有關,對同種細胞群體隨著細胞截面積的增大而增大;對球形活細胞經實驗表明在小立體角範圍內基本上和截面積大小成線性關係;對於形狀複雜具有取向性的細胞則可能差異很大,尤其需要注意。

側向散射光的測量主要用來獲取有關細胞內部精細結構的顆粒性質的有關資訊。側向散射光雖然也與細胞的形狀和大小有關,但它對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感,也能對細胞質內較大顆粒給出靈敏反映。熒光訊號主要包括兩部分:

①自發熒光,即不經熒光染色,細胞內部的熒光分子經光照射後所發出的熒光;

如何用流式細胞儀分離肺泡上皮細胞

1 取得完全無血液殘留的肺臟 實驗前將大鼠全身血液放淨,取得完全無血液殘留的肺臟。2 消化肺組織 常用於細胞消化的酶有胰蛋白酶 彈性蛋白酶 膠原酶。胰蛋白酶是最早用於消化 分離上皮細胞的酶,現在一般用損傷性小的彈性蛋白酶來替代胰蛋白酶。但這種酶卻有活性不穩定,有效作用時間短暫,容易自我降解等問題。d...

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流式細胞儀是否能檢測細菌(支原體)的大小

池慧費凌寒 我認為還是細菌或支原體汙染,支原體的可能性更大。我養的是幹細胞,也看到過這種情況,但是如果分化成成熟細胞,爬片了之後,細胞生長良好。有的時候支原體可通過0。22微米的濾膜,所以,支原體汙染比較困難。只能是嚴格遵守無菌操作,希望沒事。我自己的經驗 慚愧,汙染過好幾次 細胞汙染的觀察 400...