質粒DNA是怎樣的,質粒是如何進行復制的?

時間 2021-08-11 17:24:58

1樓:舞浪二

質粒是染色體外能夠進行自主複製的遺傳單位,包括真核生物的細胞器和細菌細胞中染色體以外的脫氧核糖核酸(dna)分子。現在習慣上用來專指細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的dna分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體。

許多細菌除了染色體外,還有大量很小的環狀dna分子,這就是質粒(plasmid)(補充:部分質粒為rna)。質粒上常有抗生素的抗性基因,例如,四環素抗性基因或卡那黴素抗性基因等。

有些質粒稱為附加體(episome),這類質粒能夠整合進細菌的染色體,也能從整合位置上切離下來成為遊離於染色體外的dna分子。 目前,已發現有質粒的細菌有幾百種,已知的絕大多數的細菌質粒都是閉合環狀dna分子(簡稱cccdna)。細菌質粒的相對分子質量一般較小,約為細菌染色體的0.

5%~3%。根據相對分子質量的大小,大致上可以把質粒分成大小兩類:較大一類的相對分子質量是40×106以上,較小一類的相對分子質量是10×106以下(少數質粒的相對分子質量介於兩者之間)。

每個細胞中的質粒數主要決定於質粒本身的複製特性。按照複製性質,可以把質粒分為兩類:一類是嚴緊型質粒,當細胞染色體複製一次時,質粒也複製一次,每個細胞內只有1~2個質粒;另一類是鬆弛型質粒,當染色體複製停止後仍然能繼續複製,每一個細胞內一般有20個左右質粒。

一般分子量較大的質粒屬嚴緊型。分子量較小的質粒屬鬆弛型。質粒的複製有時和它們的宿主細胞有關,某些質粒在大腸桿菌內的複製屬嚴緊型,而在變形桿菌內則屬鬆弛型。

在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體。人工構建的質粒可以集多種有用的特徵於一體,如含多種單一酶切位點、抗生素耐藥性等。常用的人工質粒運載體有pbr322、psc101。

pbr322含有抗四環素基因(tcr)和抗氨苄青黴素基因(apr),並含有5種內切酶的單一切點。如果將dn**段插入ecori切點,不會影響兩個抗生素基因的表達。但是如果將dn**段插入到hind iii、bam h i 或 sal i切點,就會使抗四環素基因失活。

這時,含有dna插入片段的pbr322將使宿主細菌抗氨苄青黴素,但對四環素敏感。沒有dna插入片段的pbr322會使宿主細菌既抗氨苄青黴素又抗四環素,而沒有pbr322質粒的細菌將對氨苄青黴素和四環素都敏感。psc101與pbr322相似,只是沒有抗氨苄青黴素基因和psti切點。

質粒運載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千鹼基對)。

2樓:慶育舒平惠

質粒是一種小型環狀dna,最早在細菌中發現,現在常被用作基因工程中匯入外源dna的載體。用限制性核酸內切酶和dna連結酶可以對其進行剪下和重組。

質粒是如何進行復制的? 5

3樓:

質粒是染色體外能夠進行自主複製的遺傳單位,包括真核生物的細胞器和細菌細胞中染色體以外的脫氧核糖核酸(dna)分子.現在習慣上用來專指細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的dna分子.在基因工程中質粒常被用做基因的載體.

因此,人的細胞中沒有質粒 每個細胞中的質粒數主要決定於質粒本身的複製特性.按照複製性質,可以把質粒分為兩類:一類是嚴緊型質粒,當細胞染色體複製一次時,質粒也複製一次,每個細胞內只有1~2個質粒;另一類是鬆弛型質粒,當染色體複製停止後仍然能繼續複製,每一個細胞內一般有20個左右質粒.

一般分子量較大的質粒屬嚴緊型.分子量較小的質粒屬鬆弛型.質粒的複製有時和它們的宿主細胞有關,某些質粒在大腸桿菌內的複製屬嚴緊型,而在變形桿菌內則屬鬆弛型.

cole1質粒dna的複製,是從一個特定的複製起點(ori)開始,並沿著環dna分子單向性地進行.控制此種質粒dna複製啟動的兩種關鍵因素rnai和rnaⅱ兩種rna分子,都是由cole1 dna轉錄產生的.其中rnaⅱ也叫做複製引物.

rnaⅱ分子在轉錄起點附近同互補的模板dna形成一種雜交分子,被rnaseh酶所切割,從而釋放出3′-oh末端,作為供dna聚合酶ⅰ合成dna的引物.rnaⅰ可以通過同rnaⅱ結合,以阻止其與模板dna發生雜交作用.

大腸桿菌質粒dna怎樣提取,用什麼方法

4樓:睡完這輩子

鹼裂解法:此方法適用於小量質粒dna的提取,提取的質粒dna可直接用於酶切、pcr擴增、銀染序列分析。方法如下:

1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞於2ml lb培養基。

2、37℃振盪培養過夜。

3、取1.5ml菌體於ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液。

4、加0.lml溶液i(1%葡萄糖,50mm/l edta ph8.0,25mm/l tris-hcl ph8.0)充分混合。

5、加入0.2ml溶液 ii(0.2 mm/l naoh,1% sds),輕輕翻轉混勻,置於冰浴5 min 。

6、加入0.15m1預冷溶液iii(5 mol/l kac,ph4.8),輕輕翻轉混勻,置於冰浴5 min 。

7、以10,000rpm離心20min,取上清液於另一新ep管

8、加入等體積的異戊醇,混勻後於?0℃靜置10min。

9、再以10,000rpm離心20min,棄上清。

10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次,抽乾所有液體。

11、待沉澱乾燥後,溶於0.05mlte緩衝液中

大腸桿菌質粒DNA怎樣提取,用什麼方法

睡完這輩子 鹼裂解法 此方法適用於小量質粒dna的提取,提取的質粒dna可直接用於酶切 pcr擴增 銀染序列分析。方法如下 1 接1 含質粒的大腸桿菌細胞於2ml lb培養基。2 37 振盪培養過夜。3 取1.5ml菌體於ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液。4 加0.lml溶液i 1 葡...

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