1樓：
第一步，知道你所需要測量物質的特徵吸收波長是多少？這個可以在國家標準、行業標準或其他相關標準或方法。例如測量總氮的話，就需要220和275nm這2個波長，所以必須買紫外的光度計，並且最好帶雙波長測定功能，例如測總磷是697nm，只需買臺可見光度計就可以了。
第二步，知道所測量的物質的實驗方法，需要哪些儀器和裝置，還有玻璃器皿等，同時還有比較完成測量所需要的所有化學試劑等。這個可以在標準或實驗方法中找到，基本在網際網路上都可以找到電子版的測量方法。
第三步，配置好所需測量物質的標準濃度溶液，一般是5-8個標準溶液，濃度建議從高到低，建議每個不同濃度貼上標籤，以防順序搞錯。注意，部分實驗需要往標準溶液中加顯色劑之後才可以用光度計進行測量。
第四步，設定好光度計的測量波長，這就需要熟悉光度計的基本操作，一般測量物質的濃度都是用的標準曲線法，就是對應光度計中的定量測量功能。具體操作時第一步，把儀器的波長調整到我們所需要的波長，例如測量總磷直接把波長走到697nm，之後放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱的調零。第三部把標準溶液放入樣品室，依次測量他們的吸光度，儀器一般會自動記錄之後就會給出標準曲線方程，實驗完畢。
如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之後用excel軟體進行計算標準曲線。判斷做出的標準曲線是否能用，看哪個r值即那個相關係數，一般最少做出0.999就可以用了，差一點的儀器也可以做出0.
99.第五步，把未知樣品放入樣品室就可以直接測量出樣品濃度。
2樓：匿名使用者
不知道你舊測什麼樣的樣品？不同的樣品會有不的方法
用分光光度計測定質粒dna的濃度
一、目的
熟練掌握分光光度法檢測dna純度和濃度的方法。
二、原理
dna或rna鏈上鹼基的苯環結構在紫光區具有較強吸收，其吸收峰在260nm處。波長為260nm時，dna或rna的光密度od260不僅與總含量有關，也隨構型而有差異。對標準樣品來說，濃度為1μg / ml時，dna鈉鹽的od260＝0.
02當od260＝1時，
dsdna濃度約為50μg / ml
ssdna濃度約為37μg / ml
rna濃度約為40μg / ml
寡核苷酸濃度約為30μg / ml（youyu底物不同有差異）
當dna樣品中含有蛋白質、酚或其他小分子汙染物時，會影響dna吸光度的準確測定。一般情況下同時檢測同一樣品的od260、od280和od230，計算其比值來衡量樣品的純度。
經驗值：
純dna：od260/od280≈1.8(＞1.9,表明有rna汙染；＜1。6，表明有蛋白質、酚等汙染）
純rna：1.7 ＜od260/od280＜2.0（＜1.7時表明有蛋白質或酚汙染；＞2.0時表明可能有異硫氰酸殘存）
若樣品不純，則比值發生變化，此時無法用分光光度法對核酸進行定量，可使用方案二的方法或其他方法進行估算。
三、材料、試劑及器具
1、 材料
提取的puc19樣品、puc19標準樣品
2、 試劑
滅菌重蒸水，te緩衝液
3、 器皿
石英比色皿；uv-240紫外分光光度計
四、操作步驟
1、 uv-240紫外分光光度計開機預熱10min.
2、 用重蒸水洗滌比色皿，吸水紙吸乾，加入te緩衝液後，放入樣品室的s池架上，關上蓋板。
3、 設定狹縫後校零。
4、 將標準樣品和待測樣品適當稀釋（dna5μl或rna4μl用te緩衝液稀釋至1000μl）後，記
錄編號和稀釋度。
5、 把裝有標準樣品或待測樣品的比色皿放進樣品室的s架上，關閉蓋板。
6、 設定紫外光波長，分別測定230nm、260nm、280nm波長時的od值。
7、 計算待測樣品的濃度與純度。
dna樣品的濃度（μg / μl）:od260×稀釋倍數×50/1000
rna樣品的濃度（μg / μl）：od260×稀釋倍數×40/1000
752型紫外可見分光光度計
操作規程
目的：建立紫外可見分光光度計操作規程，確保其使用安全、正確。
範圍：適用於752型紫外可見分光光度計。
操作規程：
1. 開啟儀器開關，儀器使用前應預熱30分鐘。
2. 轉動波長旋鈕，觀察波長顯示窗，調整至需要的測量波長。
3. 根據測量波長，撥動光源切換杆，手動切換光源。200-339nm使用氘燈，切換杆撥至紫外區；340nm-1000nm使用滷鎢燈，切換杆撥至可見區。
4. 調t零
在透視比（t）模式，將遮光體放入樣品架，合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。按下「調0%」鍵，螢幕上顯示「000.0」或「-000.0」時，調t零完成。
5. 調100%t/ oa
先用參比（空白）溶液蕩洗比色皿2-3次，將參比（空白）溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭乾淨，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。按下「調100%」鍵，螢幕上顯示「bl」延時數秒便出現「100.
0」（t模式）或「000.0」、「-000.0」（a模式）。
調100%t/ oa完成。
6. 測量吸光度
6.1 參照操作步驟3、步驟4。
6.2 在吸光度（a）模式，參照步驟5調100%t/ oa。
6.3 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭乾淨，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量資料。
7. 測量透視比
7.1 參照操作步驟3、步驟4。
7.2 在透視比（t）模式，參照步驟5調100%t/ oa。
7.3 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭乾淨，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量資料。
8. 濃度測量
8.1 參照操作步驟3、步驟4。
8.2 在透視比（t）模式，參照步驟5調100%t/ oa。
8.3 用標準濃度溶液蕩洗比色皿2-3次，將標準濃度溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭乾淨，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。
8.4 按下「功能鍵」切換至濃度（c）模式。
8.5 按下「▲」或「▼」鍵，設定標準溶液濃度，並按下「確認」鍵。
8.6 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭乾淨，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量資料。
9. 斜率測量
9.1 參照操作步驟3、步驟4。
9.2 在透視比（t）模式，參照步驟5調100%t/ oa。
9.3 按下「功能鍵」切換至斜率（f）模式。
9.4 按下「▲」或「▼」鍵，設定樣品斜率。
9.5 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭乾淨，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，按下「確認」鍵（此時儀器自動切換至濃度（c）模式），讀取測量資料。
10. 測量完畢
10.1 測量完畢後，清理樣品室，將比色皿清洗乾淨，倒置晾乾後收起。
10.2 關閉電源，蓋好防塵罩，結束試驗。
注意事項：
1、 調100%t/ oa後，儀器應穩定5分鐘再進行測量。
2、 光源選擇不正確或光源切換杆不到位，將直接影響儀器的穩定性。
3、 比色皿應配對使用，不得混用。置入樣品架時，石英比色皿上端的「q」標記（或箭頭）、玻璃比色皿上端的「g」標記方向應一致。
4、 玻璃比色皿適用範圍：320nm~1100nm，石英比色皿適用範圍：200nm~1100nm。
紫外可見分光光度計的具體使用方法
3樓：泉月
使用前儀器要調零、調百校準，參比溶液又稱空白溶液。測量時用作比較的、不含被測物質但其基體儘可能與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應是一條平坦的直線。
有時，基體中雖不含被測物質，但含有別的物質，這時必須保證其不影響測試。經常碰到的是試劑空白中含有被測物質，此時必須經過純化將其除去。否則將影響測定結果。
在色譜分析中，有時基體中可能存在一個以上的和被測組分相距較遠的色譜峰，計算機在資料處理中不會計入它們，不影響測定。
以所含鐵離子是多少為例：
參比溶液與測量溶液就相差鐵離子含量，在測量之前要用不含鐵離子的參比溶液掃描，調整儀器後（調100的過程），然後再測量含鐵離子溶液的比色皿，這樣測量溶液中的鐵離子會形成自己特定的峰值，次峰值與資料庫裡基準峰值對比就可以得出溶液所含量了。如果資料庫中沒有鐵離子的曲線，你還要自己先用不同鐵離子濃度的溶液做工作曲線，然後進行測量。
4樓：夏啟爾飛雙
你現在手上一共有兩種不同廠家的比色皿嗎，那隻能是用單一廠家來進行比色測定，然後對照標準曲線，這樣只在一個系統內產生誤差、很小，如果你把兩種不同廠家的比色皿混用是沒法準確得出真實吸光值的，我認為是這樣，雖然麻煩點但資料可靠~
【平の楽＼(^o^)／小平平】
紫外可見分光光度計可以測量哪些物質？求詳細步驟
5樓：段幹曦之犁長
能測得很多，甚至有本很經典的著作，就是專門講分光光度計的原理和應用的，這本書裡可以查到目前幾乎所有能用分光光度計來測量的物質的測量方法和工作波長。
分光光度計是實驗室的基礎儀器，測定的方法和原理本身很簡單。就是說化學物質對波，也就是光有一定的吸收，並且對不同波長的波的吸收程度不同。一般情況下會對某個特定波長（或者波長範圍）的吸收達到峰值，那麼對該物質的測定就在該波長下進行，因為這個時候吸光敏感，測量的靈敏度高。
光波被吸收的量與物質濃度成正比，那麼就可以根據光波被吸收的量計算出被測物濃度。
知道原理後，測定的方法就是對某種被測物進行適當的前處理，把該物質中的某代表元素轉化為能夠用分光光度法測定的形態，然後選擇適當的波長（可以查標準方法，也可以自己掃描工作波長）進行測定。一般是要自己先用標準序列做出標準曲線或者工作曲線，明確吸光度與濃度的比例關係，然後再測定樣品。根據不同的前處理及其他情況，注意選擇合適的參比。
熒光分光光度計與紫外分光光度計有何異同
宜寧奇衣 1.光源不同。2.光電倍增管不同，也就是訊號探測器不同。其他結構都可以做的一模一樣。 何晚竹針歌 1 熒光分光光度計有兩個單色器,而紫外只有一個單色器2 熒光分光光度計的光源和檢測器是成直角分佈的,而紫外是成一條直線的. 比色皿 檢測器 記錄儀這些基本一樣,主要是光源不同.紫外 可見分光光...
紫外分光光度計與高效液相色譜檢測差異
千葉雅之 說實話，這種情況不是很正常。因為紫外分光光度計和高效液相色譜的方法原理是一樣的。所以兩者測定出來的結果應該相差不多。我覺得問題可能會出在實驗方法上面。比如紫外方法，你溶解樣品時候所用的溶劑。還有高效液相方法的流動相和溶劑。比如說，我查到番茄紅素不溶於水，難溶於強極性溶劑如甲醇 乙醇等，可溶...
原子吸收分光光度計各個部分的作用
原子吸收分光光度計有單光束和雙光束兩種型別如果將原子化器當作分光光度計的比色皿，其儀器的構造與分光光度計很相似。與分光光度計相比，不同點 1 採用銳線光源 為什麼？2 單色器在火焰與檢測器之間。如果像分光光度計那樣，把單色器置於原子化器之前，火焰本身所發射的連續光譜就會直接照射在pmt上，會導致pm...