1樓:飛雪之靈
因為dna聚合酶需要結合在雙鏈區域,才能啟動後續的脫氧核糖核苷酸的聚合作用。因此需要引物(pcr中是dna,而生物體內是rna)來構成雙鏈區,從而使dna聚合酶識別並結合,啟動聚合作用。
2樓:匿名使用者
設計所需擴增基因的引物,才能擴增出你所需要的片段啊,相當於一個特異的識別模板的部位,從而啟動你所需片段的複製。
pcr擴增的過程中dna引物為什麼最後不用被切掉?
3樓:匿名使用者
一般引物是根據實驗需要人為設計的,與目的基因互補,擴增後就成為產物的一部分。其次,pcr使用的聚合酶沒有內切酶活性,無法切割擴增產物。
pcr擴增用的試劑有哪些?
4樓:北京索萊寶科技****
pcr擴增所用的試劑:
pcr擴增步驟:
1.細菌染色體dna的提取(見上一組)
2.rapd反應體系的配置(上圖)
3·反應程式:將rapd反應試劑加入ep管中 輕混後用100ul石蠟油覆蓋於反應混合液之上,防止樣品在反覆加熱-冷卻的過程中蒸發,蓋好蓋子。
開啟pcr反應儀輸入以下反應資料。
· 94 攝氏度預變性5min
· 94攝氏度變性40s
· 40攝氏度退火40s
· 72攝氏度延伸1min
將ep管放入儀器開始擴增,迴圈35次;72攝氏度延伸10min
注意事項:
1、pcr反應體系中dna樣品及各種試劑的用量都極少,必須嚴格注意吸樣量的準確性及全部放入反應體系中。
2、為避免汙染凡是用在pcr反應中的tip尖、離心管、蒸餾水都要滅菌;吸每種試劑時都要換新的滅菌tip尖。
3、加試劑時先加消毒三蒸水,最後加dna模板和taq dna聚合酶。
4、置pcr儀進行pcr反應前,pcr管要蓋緊,否則使液體蒸發影響pcr反應。
5、引物條件首先引物與模板的序列要緊密互補,其次引物與引物之間避免形成穩定二聚體或髮夾結構,再次引物不能在模板的非目的位點引發dna聚合反應(即錯配)。
5樓:匿名使用者
對於一般的pcr實驗(非特殊情況),主要試劑是:引物(上、下游引物),taq酶、dntp、mg2+、緩衝液buffer。當然,還需要準備你待擴增用的dna。
6樓:網友
反應體系:
2xbioghc elitefast sybr mastermix 10μl
上下游引物 (10μm) 各。
模板dna 10ng-1μg
50 × rox
ddh2o 加至20µl
介紹bioghc elitefast sybr kit採用本公司生產的經化學修飾的熱啟動聚合酶,有效避免了非特異擴增和引物二聚體的形成,具有高度的特異性。反應緩衝液經多次優化,與熱啟動聚合酶具有最為樂觀的搭配,使聚合酶的活效能夠得到最大程度的發揮。反應靈敏快速,40個迴圈只需20多分鐘的時間。
在20µl的反應體系裡,只要有幾個拷貝的dna分子就能被檢測出來。bioghc elitefast sybr kit具有非常強的抗干擾能力,能夠對土壤、糞便、腫瘤和血液**的複雜樣本中的靶基因進行檢測,也能不經處理直接對菌落、血液、土壤和糞便中的靶基因進行檢測分析。試劑盒以預混液的形式包裝,使用極其方便。
說明:1、bioghc elitefast sybr master mix包含dntp mix、mg2+、sybr green i、biog熱啟動聚合酶。2、一般來說反應體系中引物終濃度為0.
2μm可得到較好的擴增效果。當反應結果不理想時,可以在。
0μm範圍內調整引物濃度。3、qpcr反應靈敏性高,模板量的準確性對結果影響很大,建議將模板適度稀釋後加入,或用50ul反應體系。4、模板體積最好不超過反應體積的10%,操作過程中避免強光照射。
5、擴增產物長度請選擇在100bp-500bp範圍內。 6、反應條件:95℃加熱6-10分鐘,以啟用熱啟動dna聚合酶,然後95℃ 5-15秒,60℃ 30-35秒,進行40個迴圈。
反應條件可根據目標片段的大小、引物的tm值等適當調整。
細胞內dna複製的引物與pcr引物有何區別?
pcr擴增時為什麼需要引物呢?
7樓:
這個是dna聚合酶的特性決定的。dna聚合酶要延伸dna連,必須要有一個3`端的羥基,沒有這個結構,dna聚合酶無法合成dna。
引物的作用,就是和dna模板連特異性結合,為dna聚合酶提供3`端羥基。使得pcr繼續。
引物是一段單鏈的dna。不是rna。
8樓:叮叮貓
因為dna聚合時需要3『oh,這個只能由引物提供(沒原因,就因為是那樣)。這個引物是一小段rna ,引物絕對是rna,而不是dna。看看dna複製需要什麼酶就知道了,需要依賴dna的rna聚合酶(ddrp)如果是dna,那麼複製的時候要引物幹什麼呢?
我直接用互補脫氧核糖核酸就完了,幹嘛還弄一引物,然後複製完再水解掉?本人生化學的還是不錯的,別人都說難,我也不覺得。
為什麼有了pcr技術還要用大腸桿菌做dna擴增
9樓:南京金益柏生物科技****
這個有多方面的原理:
一個:pcr有錯誤,雖然這個錯誤率很低,普通的酶大概在千分之一,而高保真的在百萬分之一,但畢竟有。
二個:基因儲存的問題:pcr產物當然也可以儲存,但儲存時間長了會不會出問題?
能儲存幾年?克隆進質粒就不一樣了,這個基本可以儲存很久,哪一天想要這個基因,拿出來搖一小瓶就可以了。
三個:單克隆性,pcr片斷可能有長有短(還有突變),而質粒就不一樣了,可以挑單克隆,測序正確後就認為這是我們想要的基因。
四個:做基因表達時連線方便。如果pcr產品上沒有酶切位點,克隆載體上有,切下來可以連到表達載體上。
象有些人做基因庫時,都是克隆到載體上,肯定是這樣有很多優點的。
pcr擴增得到的dna序列長度是為什麼固定的?
10樓:匿名使用者
長度從上下游引物的5『端為節點,如果你設計的引物特異的話,這個距離肯定是恆定的,除非位於兩個引物之間的序列有缺失,這種情況比較少。
11樓:小蠻
因為你的引物設計是特異的,所以引物會在相同位置靶定,得到相同序列。當然如果模板不純或者引物不特異,就會擴出其他的序列~~~
12樓:網友
pcr產物的長度是由你使用的引物對在模板dna上的位置決定的。
13樓:網友
dna聚合酶只能特異地複製處於兩個引物之間的dna序列。
pcr擴增dna的注意事項是什麼?
14樓:士誠小人也
按基本操作流程做就可以了。
新手的話多做一些對照,最好每次都做個陰性對照,可以知道是否發生了汙染。
進行PCR擴增時為什麼將cDNA稀釋以後就出現引物二聚體了
根本原因應該是rna純度不夠,導致反轉錄的cdna濃度低。稀釋之後dna與引物結合的機會少了,引物自己結合成二聚體.多種原因要逐一排除 1.先用內參基因檢測一下如 actin,gapdh,18s rrna這類基因是生物體或者細胞中穩定表達的基因,表達量幾乎不變,如果有條帶證明反轉錄沒問題。2.內參檢...
為什麼線粒體裡只遺傳母親的DNA
以下是2016年6月的一篇新聞報道。一個國際團隊24日說,他們探清了為什麼線粒體dna不能通過父親的精子,而只能通過母親的卵子遺傳給後代。線粒體是細胞中提供能量的細胞器,被稱作細胞的 能量工廠 這項發表在新一期美國 科學 雜誌上的研究報告說,當精子與卵子結合成受精卵後,精子中的線粒體會啟動一套自毀機...
為什麼重複序列越多的dna復性越快
飛雪之靈 原理是這昂的 重複序列多,說明這一段dna序列是由很多相同的序列加以重複而組成的。復性過程是兩條互補的雙鏈結合的過程,如果重複序列多的話,那麼互補的兩個序列更容易遇見而復性。舉個例子,比如atatatat這個序列,和atcgatcg這個序列相比,at 這個重複更容易遇見 at 這個重複來複...