1樓：雷昊文庫
你好：我所知道的酶切的目的大致分為兩大類：載體的檢測和southern預備實驗。
你做的如果是常規的pcr檢測，一般不需要酶切後再電泳，只是檢測一下你的目的基因是否成功進入你的受體材料，酶切後反而看不出來了。
酶切的依據是你自己的載體圖中酶切位點的位置與類別，根據不同的酶切位點選擇不同種類的酶。酶切位點一般設定在你插入的目的基因的兩側，如此一來，經過簡單的酶切，就可以將你所需要的目的條帶完整的切下來，再經過瓊脂糖凝膠電泳將兩者分離。在此說一下凝膠電泳的原理，在瓊脂糖凝膠的膠微粒之間，存在著能夠容許dna通過的間隙，通過的速率取決於你的dna的分子量，分子量越大遷移率越慢，反之亦然。
舉個例子，你的載體或基因組是10bp，你的目的條帶是3bp，對你的材料進行酶切後，一般會出現三條清晰的條帶，高度由上至下依次為（越高分子量越大）：
1.酶切不完全殘留的完整基因組條帶10bp
2.酶切後剩餘部分的載體，大約7bp（10bp-3bp）
3.你的目的基因，3bp(10bp-7bp)
不知您明白了沒有，如果是pcr的話，一般不需要酶切！（還是同其他人說的一樣，要先明確你電泳的目的是什麼，然後再看到底需不需要酶切。）
2樓：匿名使用者
你要具體說說為什麼電泳啊……我覺得很可能是看外源片段是不是連進去了啊……
3樓：晴川歷歷
呃，簡單地說，質粒dna酶切是因為我們之前在質粒上插入了一些目的片段，將質粒轉到細菌裡，細菌繁殖，再抽繁殖後的細菌裡的質粒，就可以得到大量的含有目的片段的質粒，但我們要的是目的片段，質粒上的其他東西要去掉才行，所以要酶切，把我們要的片段切下來，可是切後目的片段與質粒其他片段混在一起，就要電泳把它們分開，把目的片段條帶處的膠切下來，純化，就得到大量的目的片段了。當然，也可以用此方法判斷你的目的片段是不是正確插入質粒了。
不知道你具體想幹什麼，不過感覺你的目的是鑑定成纖維細胞dna中某一基因的表達情況，那就和酶切無關了，至少和我上面說的那種酶切無關。
good luck~~~~~
dna限制酶切和瓊脂糖凝膠電泳中常說的marker是什麼？還有loading dye 在實驗中起到什麼作用？
4樓：小蠻
dna的限制性酶切
限制性內切酶特異性地結合於一段被稱為限制酶識別序列的特殊dna序列之內或其附近的特異位點上，並在此處切割雙鏈dna。
loading buffer 的中文名字叫上樣緩衝液,6*的緩衝液中可以顯示兩條帶，前面的藍色的條帶是溴酚藍，代表的片段大小是 300bp，後面的有點綠色的條帶是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。 loading buffer的功能主要有兩個。第一，裡邊的指示劑溴酚藍和二甲苯酚起到指示的作用，顯示電泳的程序，以便我們適時終止電泳；第二，裡邊的成分甘油可以加大樣品密度，使樣品密度大於tae，從而沉降到點樣孔中，防止樣品飄出點樣孔。
另外，有的buffer是加有sds的，一般都會寫明。sds主要是促使聚合酶變性，因為沒有除盡的聚合酶會結合在dna雙鏈上影響它的遷移速率。細胞裂解後的裂解液，加loading 100℃加熱，也是為了中止酶促反應，防止提取的蛋白質降解。
loading dye 是跑瓊脂糖凝膠用來染dna的染料,它是和loading buffer按一定的比例混合而成的.有的進口試劑buffer裡已經加了loading dye的,就不用加了.試劑說明書都有說明的.
.瓊脂糖凝膠電泳marker是用來做參考的，類似於標尺的作用。
marker會跑出很多條帶，對應帶的片段長度是一定的（不
5樓：匿名使用者
1. 沒紫外線，確定電源完好？燈管都是好的？ 2. 你的樣本加了熒光染料沒有？比如溴乙錠，或者sybr green。 你沒有染色吧……
6樓：貓太郎
1. marker是分子量標準 你要知道電泳時 分子量越小的跑得越快 這樣的你的酶切產物電泳後形成的條帶 就可以對照marker知道是多大分子量的了
2. loading dye 一般用溴酚藍或二甲苯青 和混在上樣緩衝液裡 和 樣品一起點到點樣孔中，電泳過程中 dye也會往前移動。在特定濃度的凝膠裡 dye的遷移率會和特定的分子量dna速度一樣。
目的是為了知道電泳跑到什麼時候可以停止，起指示作用的。 否則一大塊膠 沒有指示dye，你也不知道改跑到什麼時候 還得跑跑就得紫外照照
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用
7樓：
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用是分子標記。
dna分子標記具有的優越性有：大多數分子標記為共顯性，對隱性性狀的選擇十分便利；基因組變異極其豐富，分子標記的數量幾乎是無限的；在生物發育的不同階段，不同組織的dna都可用於標記分析；分子標記揭示來自dna的變異；
表現為中性，不影響目標性狀的表達，與不良性狀無連鎖；檢測手段簡單、迅速。隨著分子生物學技術的發展，dna分子標記技術已有數十種，廣泛應用於遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關係鑑別、基因庫構建、基因克隆等方面。
擴充套件資料
標記（marker），染色體上一個可以被識別的區域（比如限制性內切酶的酶切點，基因的位置等）。標記的遺傳能夠被檢測出來。標記可以是染色體上有表達功能的部分（比如基因），也可以是沒有編碼蛋白質功能但遺傳特效能夠被檢測出來的部分。
蛋白marker可分為：
未預染的marker即寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準；
預染的marker即單色預染和多色預染。
在western blot過程中，分子量marker就像個螺絲釘一樣雖然是個小細節，然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。
這個western blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量精確無誤，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。
8樓：之炎彬
你好！所謂「凝膠」是指在一定形狀的制膠容器中所形成的包含電解質的多孔支援介質。當核酸分子位於凝膠的某個部位，在電場作用下，，在電場中核酸分子將從負極向正極移動。
泳動速度取決於dna的大小和構型，dna相對分子質量越大，分子帶電量越小，其電泳的遷移率就越小，反之則越大。
dna電泳一定要使用dna marker或已知大小的正對照dna來估計dn**段大小。所以，在同一個點樣孔中如果有不同大小和構型的dn**段（即marker），電泳後就會在膠片上出現多條不同位置的條帶，這些條帶相當於尺子上的刻度，因此就可以用來測算未知dna樣品的大小。
簡言之，marker就是參照標準。
希望你能理解！
9樓：
你好，瓊脂糖凝膠電泳marker是用來做參考的，類似於標尺的作用。
marker會跑出很多條帶，對應帶的片段長度是一定的（不同的marker，不同，可以查詢）；通過找到與樣品平齊的帶，可以間接地判定樣品的片段長度。
這是我個人的理解，不知道描述清楚了沒。
10樓：匿名使用者
樓上都說了marker是判斷dna大小的作用，那我在補充兩個吧，一個是假如樣品電泳沒有出現條帶，可以從marker有沒有跑出來判斷是核酸膠的問題還是樣品的問題，所以marker平時一定要點。還有一種功能也很重要，就是定量，marker中的條帶總的也就分兩種左右的濃度，具體濃度可以問marker**商，電泳後可以根據肉眼直接毛估估dna或rna濃度範圍，還是比較準的，另外也有專門的軟體幫助定量。有必要的話再進行紫外精確定量。
11樓：匿名使用者
可以看到6.50kd 14.3kd 20.
1kd 29.0kd 44.3kd 66.
4kd 97.2kd 116kd 200kd這幾種分子量的蛋白質分佈情況，考染或銀染。
用瓊脂糖凝膠電泳怎麼檢測dna質量 什麼是標準
12樓：北京索萊寶科技****
dna如果降解或者混有其他雜質比如蛋白質、rna的話,在電泳中可以檢測的到.
線性的單一dna樣品一般是單條帶,質粒的話可能會有2-3條帶.
如果條帶變寬、變暗、或者變成彌散的dna條帶,表示dna非特異的降解.『
如果條帶變成多條,表示可能被酶切.如果質粒被單酶切,可能變成一條亮帶.
如果有蛋白質汙染,上樣孔可能發亮.如果有rna汙染,可能小分子量部分會有彌散.
等等.標準是電泳條帶亮度.通過亮度可以粗略計算dna條帶的含量.如果dna有損失,對應的條帶會變暗或者消失
瓊脂糖凝膠電泳的原理什麼，簡述凝膠電泳的原理與方法
汪小東最懷薰 瓊脂糖凝膠具有網路結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在湧動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決於淨電荷的性質和數量，而且還取決於分子大小，這就大大提高了分辨能力。但由於其孔徑相比於蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用於核酸的研究中。...
瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什麼？需要注意什麼事項
一 操作步驟 1 電泳方法 一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以 如果需要解析度高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯醯胺凝膠電泳 用普通電泳不合適的巨大dna鏈應該使用脈衝凝膠電泳。2 凝膠濃度 對於瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5 2 之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃度...
DNA瓊脂糖電泳後的熒光條帶怎麼看
克隆實驗中dna瓊脂糖凝膠電泳的圖 跑膠圖 怎麼看。瓊脂糖是線性的多聚物，基本結構是1,3連結的 d 半乳糖和1,4連結的3,6 內醚 l 半乳糖交替連線起來的長鏈 瓊脂果膠是由許多更小的分子組成的異質混合物。瓊脂糖在水中一般加熱到90 以上溶解，溫度下降到35 40 時形成良好的半固體狀的凝膠，這...