1樓：匿名使用者
1. 定量細胞濃度
2. 分為2組，一組為實驗組，另一組為抗體對照組3. 兩組都先加入非特異性的igg，封閉可能的fc受體4.
按照抗體生產廠家的推薦濃度加入抗體，對照組加入同樣熒游標記的非特異性同型抗體。
5. 4°孵育半小時
6. 用含0.5% bsa的pbs洗2遍
7. 上機後先用抗體對照組設定陰性gate。
8. 檢測樣本。
2樓：匿名使用者
1.貼壁細胞：用胰酶消化後，吸去胰酶，加pbs吹打下來，離心；懸浮細胞直接離心。
2.棄去上清，加入用pbs稀釋好的抗體(已用fitc或pe等標記），旋渦振盪，使用細胞均勻懸浮，室溫避光孵育0.5h。
3.孵育後加1mlpbs,1000rpm離心5min，棄去上清，再加入1mlpbs，1000rpm離心5min，棄去上清。
4.加入500ulpbs重懸細胞，4℃避光儲存，儘快上機檢測。
要做一管不加抗體的做空白對照。
3樓：
那你就先拿抗體和細胞孵育 然後拿去過流失就可以啦
請教流式細胞的具體實驗步驟
流式細胞術的作用原理
4樓：匿名使用者
流式細胞術（flow cytometry, fcm）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，並能同時從一個細胞中測得多個引數，與傳統的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優點。
將待測細胞染色後製成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷流式細胞術酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區域。
流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。經過聚焦整形後的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在鐳射束的照射下，產生散射光和激發熒光。這兩種訊號同時被前向光電二極體和90°方向的光電倍增管接收。
光散射訊號在前向小角度進行檢測，這種訊號基本上反映了細胞體積的大小；熒光訊號的接受方向與鐳射束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光訊號。
這些熒光訊號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度，經光電倍增管接收後可轉換為電訊號，再通過模/數轉換器，將連續的電訊號轉換為可被計算機識別的數字訊號。計算機把所測量到的各種訊號進行計算機處理，將分析結果顯示在計算機螢幕上，也可以列印出來，還可以資料檔案的形式儲存在硬碟上以備日後的查詢或進一步分析。
檢測資料的顯示視測量引數的不同由多種形式可供選擇。單引數資料以直方圖的形式表達，其x軸為測量強度，y軸為細胞數目。一般來說，流式細胞儀座標軸的解析度有512或1024通道數，這視其模數轉換器的解析度而定。
對於雙引數或多引數資料，既可以單獨顯示每個引數的直方圖，也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體檢視。
細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電後振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現細胞的分離。
如何通過流式細胞術鑑定sd大鼠中性粒細胞表面抗原
5樓：匿名使用者
呵呵，分選抄
中性細胞，襲其實都不用抗體標記的。
在fsc/ssc散點圖上，可以很清楚的區分淋巴細胞，粒細胞和單核細胞。
在粒細胞中，中性佔有絕大多數。嗜酸性和嗜鹼性細胞可以忽略不計的。只要把中性分選出來就可以了。
你把這樣分選的細胞用瑞氏染色看一下純度。
求流式細胞術做凋亡的操作步驟和注意事項
6樓：匿名使用者
博凌科為解答：僅供參考一下：流式樣品的準備：
dna含量的測定：用本法可以測定細胞週期、細胞倍體和凋亡，在樣品的製備中存在的問題主要是細胞的聚集和碎片，建議在固定細胞時加入3％小牛血清。1 培養或分離的細胞約110 6，離心沉澱後用0.
3ml含10％小牛血清的pbs懸浮，移入1.5mlep管中，加入0.7ml無水乙醇，置－20攝氏度下固定細胞24小時以上（用本法制定的細胞可以在－20攝氏度下儲存一週甚至更長的時間）。
2 3000rpm離心細胞30妙，吸棄上清，用1mlpbs重懸細胞，再離心洗滌細胞一次，吸棄上清，沉澱細胞用100ul 1mg/ml rnase a懸浮，37攝氏度30min，再加入400ul 50ug/ml pi，置暗處10min後上機檢測。3 結果分析：流式報告中可給出g0/g1、s、g2/m各期細胞的百分比，凋亡百分比和細胞倍體。
如何用流式細胞儀分離肺泡上皮細胞
1 取得完全無血液殘留的肺臟 實驗前將大鼠全身血液放淨，取得完全無血液殘留的肺臟。2 消化肺組織 常用於細胞消化的酶有胰蛋白酶 彈性蛋白酶 膠原酶。胰蛋白酶是最早用於消化 分離上皮細胞的酶，現在一般用損傷性小的彈性蛋白酶來替代胰蛋白酶。但這種酶卻有活性不穩定，有效作用時間短暫，容易自我降解等問題。d...
如何用流式細胞儀分離肺泡上皮細胞
1 取得完全無血液殘留的肺臟 實驗前將大鼠全身血液放淨，取得完全無血液殘留的肺臟。2 消化肺組織 常用於細胞消化的酶有胰蛋白酶 彈性蛋白酶 膠原酶。胰蛋白酶是最早用於消化 分離上皮細胞的酶，現在一般用損傷性小的彈性蛋白酶來替代胰蛋白酶。但這種酶卻有活性不穩定，有效作用時間短暫，容易自我降解等問題。d...
流式細胞儀的工作原理是什麼
緋攻 流式細胞儀主要由四部分組成 流動室和液流系統，鐳射源和光學系統，光電管和檢測系統，計算機和分析系統。四大系統共同完成訊號的產生 轉換和傳輸任務。檢測時將待測細胞或微粒製成細胞懸液，進行熒光染色後加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓 動室，在高壓下磷酸緩衝液 鞘 液 從鞘液管噴出，鞘液管人口方向...