什麼是層析分離法

時間 2023-01-20 16:25:03

1樓:匿名使用者

利用各組分物理性質的不同,將多組分混合物進行分離及測定的方法。有吸附層析、分配層析兩種。一般用於有機化合物、金屬離子、氨基酸等的分析。

層析利用物質在固定相與流動相之間不同的分配比例,達到分離目的的技術。層析對生物大分子如蛋白質和核酸等複雜的有機物的混合物的分離分析有極高的分辨力。 基本原理 層析須在兩相系統間進行。

一相是固定相,需支援物,是固體或液體。另一相為流動相,是液體或氣體。當流動相流經固定相時,被分離物質在兩相間的分配,由平衡狀態到失去平衡到又恢復平衡,即不斷經歷吸附和解吸的過程。

隨著流動相不斷向前流動,被分離物質間出現向前移動的速率差異,由開始的單一區帶逐漸分離出許多區帶,這個過程叫展層。

係數k是物質在兩相中的濃度比。k值大,則在固定相中吸附牢,k值小吸附差。各物質間的k值差別大,則易被分離。

不同型別層析的k值含義不同,可視為吸附平衡常數,分配常數或離子交換常數等。

研究層析現象而發展的塔板理論,與有機化學實驗中的分餾法原理有些相似。被分餾的有機溶劑在分餾柱內的填充物上形成許多熱交換層,從而把低沸點溶劑先分餾出來,達到純化的目的。在層析時用理論塔板數n來衡量層析效能。

tr為物質在層析柱上的保留時間,w為洗脫下來的物質峰形的寬度。n值愈大表示層析柱的效能愈高。如用理論塔板高度h表示,則包含了層析柱長度的因子。

式中l為層析柱的柱長。h值越大,則柱效越低。

此外影響層析分離效果的還有渦流擴散、縱向擴散和傳質阻抗等因素。因此選擇層析固定相支援物的粒度、均勻度等物理效能,流動相的層析系統和溫度等都是做好層析的關鍵。

2樓:匿名使用者

各種不同的層析方法都涉及共同的基本特點:有一個固定相和流動相,當蛋白質混合溶液(流動相)通過裝有珠狀或基質材料的管或柱(固定相)時,rightleder由於混合物中各組份在物理化學性質(如吸引力、溶解度、分子的形狀與大小、分子的電荷性與親和力)等方面的差異使各組分在兩相間進行反覆多次的分配而得以分開。流動相的流動取決於引力和壓力,而不需要電流。

用層析法可以純化得到非變性的、天然狀態的蛋白質。層析的方法很多,其中凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等是目前最常用的層析方法。

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