1樓：
基質輔助鐳射解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, maldi-tof ms)是20世紀80年代發展起來的一種新型軟電離有機質譜, 作為一種新興的蛋白質組學檢測技術, 現已廣泛應用於生命科學及相關領域。同時作為一項新興的微生物鑑定技術, 受到了國內外的廣泛關注。與傳統的生化表型鑑定方法和分子生物學方法相比, maldi-tof ms具有操作簡單、快速、準確和經濟的特點。
早在2023年, anhalt等[1]利用質譜儀結合高溫裂解技術第1次完成了細菌的鑑定, 從此拉開了質譜鑑定細菌的「 序幕」 。隨著質譜檢測技術的不斷完善和發展, 近年來, maldi-tof ms已經成功應用於微生物的鑑定, 顯示了其在細菌、酵母菌等鑑定方面均具有良好的應用價值。眾多的研究表明, maldi-tof ms技術對培養出的純菌落進行菌種鑑定具有很高的穩定性及準確性, 對常見細菌和酵母菌的屬的鑑定率能達到97%~99%, 種的鑑定率也能達到85%~97%; 另外, maldi-tof ms大大縮短了細菌鑑定的時間, 而且其成本也較常規鑑定方法低[2, 3]。
除此之外, maldi-tof ms已經能夠成功地用於部分微生物亞種水平的鑑定和細菌耐性的檢測, 但這種方法在大多數情況下是應用於培養出的純菌落的鑑定[3]。
如果能夠從臨床樣本中直接檢測細菌/真菌, 突破細菌/真菌培養陽性率低、培養時間長的瓶頸, 為細菌/真菌感染性疾病的診療提供更快、更準確的病原學依據, 將對臨床及時控制細菌/真菌感染性疾病起到更大的作用。國內外學者已嘗試將質譜技術應用於臨床樣本的直接檢測, 並取得了顯著的進展。本文就maldi-tof ms技術在臨床樣本的直接檢測應用作一綜述。
一、maldi-tof ms檢測原理
maldi-tof ms技術用於微生物鑑定的實質就是檢測具有屬、種或亞型特異性的生物標誌的質量訊號, 主要是微生物菌體內高丰度、表達穩定和進化保守的核糖體蛋白。maldi-tof ms 儀器主要由基質輔助鐳射解吸離子源(maldi)和飛行時間質量檢測器(tof)兩部分組成。maldi的原理是用一定強度的鐳射照射樣本與基質形成的共結晶薄膜, 基質從鐳射中吸收能量而汽化, 並迅速降解, 使樣本分解吸附, 基質和樣本之間發生電荷轉移從而使樣本分子發生電離; tof的原理是帶有電荷的樣本分子在電場作用下加速飛過飛行管道, 因為離子的質荷比與離子的飛行時間呈正比, 所以不同質量的離子因達到檢測器的飛行時間不同而被檢測, 以離子峰為縱座標、離子質荷比為橫座標形成特徵性的質量圖譜。
將不同種屬微生物經maldi-tof分析所形成的質量圖譜與資料庫中的參考圖譜進行比較, 從而實現對目標微生物種或菌株的區分和鑑定[2]。
二、maldi-tof ms直接檢測臨床樣本的流程
臨床樣本直接檢測的流程主要包括3個部分:臨床樣本的預處理、樣本上機檢測和對比蛋白質指紋圖譜資料庫得出鑑定結果。由於目前報道最多的臨床樣本是陽性血培養瓶和中段尿樣本, 下面將以這二者為例介紹其直接檢測的流程, 其它臨床樣本的檢測流程與之類似。
(一)臨床樣本預處理
maldi-tof ms直接用於臨床樣本的檢測有2個基本的要求:(1)臨床樣本中細菌的量。為了得到準確的鑑定圖譜, maldi-tof ms技術對置於靶板上的細菌的最低檢測限約為(1× 10^4)~(1× 10^6)cfu/ml。
若要直接檢測擬似血流感染的血液樣本以及擬似泌尿系統感染的中段尿等臨床樣本中的病原菌, 首先必須富集細菌; (2)臨床樣本的質。由於血液和血培養瓶中的大分子成分如血紅蛋白和其它蛋白成分、尿液中的白細胞等有機成分會干擾細菌的譜峰, 所以直接檢測前需要採取預處理措施去除這些干擾因素。
1.陽性血培養瓶直接檢測 直接檢測陽性血培養瓶的細菌濃度常常需要1× 10^7 cfu/ml[2, 4]。由於在血流感染患者血液中的細菌量常常很低(最低可< 1~10 cfu/ml), 因此對血樣本的直接檢測需要一個增菌的過程, 即採用血培養瓶增菌。
目前已報道的陽性血培養病原菌預處理程式各不相同, 但預處理過程主要包含了以下2個步驟:(1)將細菌從血細胞中分離出來。先應用溫和去汙劑(如吐溫-80、十二磺基硫酸鈉、皁素等)將血液中的血細胞溶解, 然後通過不同的流程(離心、洗滌)去除其它的干擾因素, 純化要鑑定的細菌樣本; (2)將菌體中的蛋白質抽提出來。
最常用的是混合溶劑處理法, 使用甲酸/乙腈溶液對樣本進行處理來抽提蛋白, 利用2種溶劑的混合作用將菌體表面的蛋白和存在於細胞
2樓：融智生物
這個不一定，因為首先要進行細菌培養，這個培養時間的話幾個小時到十幾個小時都有可能，培養完之後打質譜的時間就很快了，有的儀器只需要十分鐘就可以打96個樣品。
3樓：匿名使用者
目前用於細菌等微生物鑑定的質譜儀是maldi-tof ms質譜系統，具體鑑定時間要根據相關儀器的效能來確定，目前國內比較好的微生物質譜儀比如quanid，10min內可完成超過100個樣本的檢測，進口的微生物質譜儀鑑定速度不比這個快。供參考。
梅里埃細菌鑑定儀做革蘭陰性桿菌的鑑定多長時間出
4樓：歐陽俠
不同的bai細菌需要的時間會存du在差異，細菌生化zhi反應明顯那麼需要的dao時間就短，反專之就長。大約10到24小時屬
就可以鑑定出，很多情況下不僅僅是把細菌鑑定出是什麼細菌就結束了，而是需要進行藥敏試驗，這樣才能指導臨床**。
學習細菌做分離鑑定藥敏試驗要多久? 10
細菌培養需要多長時間
5樓：一生摯愛車
培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、ph值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標本接種於固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑑定。
培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天后生長。
個別細菌如結核菌要培養1個月之久。
血液真菌g和gm試驗需要多少時間
6樓：種賦奚永昌
病情分析：您好，這兩個都是用來診斷是否有侵襲性真菌感染的
指導意見：建議：這個檢測來說真菌培養需要1~2天，這個假陽性率比較高，通常是要檢測兩次，如果2次都是陽性的話，可以降低假陽性率。
7樓：
血液g和gm試驗，要多長時間
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