1樓:月似當時
pcr中引物的作用是作為dna複製開始時dna聚合酶的結合位點,在細胞外的條件下,只有通過引物,dna才可以開始進行復制。
人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
pcr反應中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條dna單鏈為基準(常以資訊鏈為基準),5′端引物與位於待擴增片段5′端上的一小段dna序列相同;3′端引物與位於待擴增片段3′端的一小段dna序列互補。
擴充套件資料
引物設計的基本原則:
1、引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。
2、引物鹼基:g+c含量以40-60%為宜,g+c太少擴增效果不佳,g+c 過多易出現非特異條帶。atgc最好隨機分佈,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。
3、引物內部不應出現互補序列。
4、兩個引物之間不應存在互補序列,尤其是避免3 ′端的互補重疊。
5、引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續8個鹼基在待擴增區以外不能有完全互補序列。
2樓:喵喵喵啊
pcr中引物的作用:找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板dna序列。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與目的基因一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與目的基因另一端的另一條dna模板鏈互補。
在pcr(聚合酶鏈式反應)技術中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根據這一序列合成引物,利用pcr擴增技術,目的基因dna受熱變性後解鏈為單鏈,引物與單鏈相應互補序列結合,然後在dna聚合酶作用下進行延伸,如此重複迴圈,延伸後得到的產物同樣可以和引物結合。
擴充套件資料
pcr引物設計
pcr反應中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條dna單鏈為基準(常以資訊鏈為基準),5′端引物與位於待擴增片段5′端上的一小段dna序列相同;3′端引物與位於待擴增片段3′端的一小段dna序列互補。
引物設計的基本原則:
1、引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。
2、引物鹼基:g+c含量以40-60%為宜,g+c太少擴增效果不佳,g+c 過多易出現非特異條帶。atgc最好隨機分佈,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。
3、引物內部不應出現互補序列。
4、兩個引物之間不應存在互補序列,尤其是避免3 ′端的互補重疊。
5、引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續8個鹼基在待擴增區以外不能有完全互補序列,否則易導致非特異性擴增。
6、引物3『端的鹼基,特別是最末及倒數第二個鹼基,應嚴格要求配對,最佳選擇是g和c。
7、引物的5′端可以修飾。如附加限制酶位點,引入突變位點,用生物素、熒光物質、地高辛標記,加入其它短序列,包括起始密碼子、終止密碼子等。
3樓:匿名使用者
一般pcr使用兩條引物,前後各一條,與模版dna結合上後,前後的引物形成複製起始位點,共同向中間擴增,直到連上,一次擴增完成。
4樓:張曉慶張曉慶
起始dna複製的,,,dna聚合酶沒有起始複製的功能只有延伸複製的功能,故需要一段引物來起始複製
5樓:匿名使用者
與單鏈的dna配對 形成複製起始點
6樓:
先是配對上,再開始逐漸合成
pcr引物是什麼?
7樓:點點星光帶晨風
聚合酶鏈式反應簡稱pcr(polymerase chain reaction) (又稱:多聚酶鏈式反應) pcr是體外酶促合成特異dn**段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等反應組成一個週期,迴圈進行,使目的dna得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
它不僅可用於基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用於疾病的診斷或任何有dna,rna的地方。pcr又稱無細胞分子克隆或特異性dna序列體外引物定向酶促擴增技術。
8樓:暴走少女
pcr引物又稱為寡核苷酸引物,也就是rna,是由人工合成的,分為兩種,引物1和引物2。由於dna聚合酶只能從核苷酸鏈的5'端到3'端進行復制,也就是隻能識別3'的尾端。
而且只能把核苷酸連到已經和dna模板互補產生的多核苷酸鏈上,所以引物1和2分別於雙鏈dna的兩條鏈的尾部(就是末尾是3'端的那一邊)結合,為那些脫氧核苷酸提供3'的末端,就相當於開了個頭。然後在dna聚合酶的作用下合成兩條新鏈。而那段引物就成了新鏈的一部分。
9樓:白色的妖精
通俗的講,引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷,在pcr反應中,新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製。引物的設計因需要增幅的序列而不同。舉個例子來說,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了)
那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料。
查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:
1、待測菌體。試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物。
2、提純的dna。如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司。dna純度要求可以做pcr。
ps:很佩服樓主充足的經費,我們這裡同定一次要2800人民幣……
10樓:匿名使用者
pcr的目的是大量擴增你所需要的片斷。換句話說,就是用人工的方法大量複製dna。而dna的複製是以一條鏈為模板,新合成鏈按照鹼基互補配對進行的。
可是有一個問題,dna的合成必須是前端有一小段序列,他接著這段序列合成,而不能從無到有,憑空合成。它前面這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是dna也可以是rna,一般20多bp.
需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物
pcr中正向引物和反向引物的概念和具體作用?
11樓:不乖的
正向引物和反向引物是相對的,通常以一個雙鏈dna(上面的那條鏈)的上游結合部位稱為正向引物,是從左到右的方向,也就是5-3的方向,而下面那條互補鏈的下游結合部位稱為反向引物。
其方向是從右到左的,因為下面的鏈的方面從左到右是3-5,從右到左就是5-3了,pcr的擴增的確是一條引物就可以擴增了。
反向引物的存在可以結合互補鏈,使互補鏈的擴增方向也是5-3,這樣一次就是兩條鏈同時擴增,迴圈一次就是4條鏈同時擴增再迴圈一次就是8條鏈同時擴增,這樣才是所謂的幾何級數擴增。
正向合成時延伸到反向引物結合位點時就會停止,同理反向引物也是。
12樓:蠢羊羊
沒有反向引物,難道正向引物無限制合成下去嗎?一條pcr條帶需要兩端兩條引物對向walking才能合成。
13樓:託託小俠客
正向跟反向就是所謂的上下游引物.如果沒有下幼引物那你擴增出來的片段就是你的正向引物的位置一直到你的序列結束,而且基本上擴不出來
pcr中,引物是什麼意思?
14樓:淵源
引物就是為了增幅bai目的dna而導du入的短小dn**斷,在zhipcr反應中,新合成的dna是要接在引dao物上才能繼續按照模
專版dna複製屬.引物的設計因需要增幅的序列而不同.舉個例子來說,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了)
那麼一般來說,你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去,具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料.
查了一下測序公司的網頁,如果要同定微生物,樓主需要準備如下東東:
1、待測菌體.試管或培養皿都可以,但必須是純粹的待測菌體,不能含有其他的微生物.
2、提純的dna.如果1有致病性或傳染性,那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司.dna純度要求可以做pcr.
pcr引物到底是什麼?在pcr過程中起什麼作用?
15樓:浦恨真汝嬋
pcr技術中的引物的
bai本質和作用。du
引物是一小
zhi段單鏈dna或rna,引物可以做為daodna複製專開始時dna聚合酶的結合位屬點,在細胞外的條件下,只有通過引物,dna才可以開始進行復制。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
啟動子和引物兩者的區別:
啟動子是dna分子上能與rna聚合酶結合並形成轉錄起始複合體的區域,在許多情況下,還包括促進這一過程的調節蛋白的結合位點,決定rna聚合酶轉錄起始位點的dna序列。
引物是一小段單鏈dna或rna,引物可以做為dna複製開始時dna聚合酶的結合位點,在細胞外的條件下,只有通過引物,dna才可以開始進行復制。引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
啟動子是位於結構基因前的非編碼區對轉錄起調控作用的一段dna序列。引物則是遊離於dna複製的模板鏈之外的對dna複製起調控作用的一小段單鏈dna或rna。
16樓:陀芷天鈔彭
通俗的講,引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷,在pcr反應中,新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製。引物的設計因需要增幅的序列而不同。
17樓:卿天亦逮季
我是bai高中生(至少三個du月以前還是)所zhi以我所說的你大概可以dao理解
pcr的意思是聚合內酶鏈式反應,是容一種擴增dna的技術(就是複製dna)
dna複製其實很複雜,dna聚合酶有一種特性,他只能把脫氧核糖核酸接到一段現有的dna或rna上,這樣你就能明白了吧。第一個位置上的脫氧核糖核酸沒辦法弄到了。在人體內這個部分是由rna聚合酶完成的,先由這個酶在基因的第一段複製出一小段rna,然後再由dna聚合酶在後面添上以後的dna。
這段rna就叫rna引物。等都填完後再由引物酶把這段rna切掉換成dna(這種做法有一個毛病,會引起5'端縮短,不過你不需要理解)
pcr中可以用已經合成的dna引物來代替rna引物。這些就是引物的作用
18樓:朋珍瑞潮靖
。。。高中。抄。。現
在高中生物還有pcr啊。。。真高階
引物就是一段小的dn**段,作用麼,簡單的說就是定位的作用,讓pcr知道該p哪一段dna咯~
就好比是一條很長的鎖鏈,你只想要得到中間的某一段,頭上的和尾上的多於部分都是不需要的,你要告訴生產廠家你要的那段的位置,他們才能幫你準確的複製你想要的那段,所以你就需要兩個小片段,在你要的那段兩端做上標記,以方便廠家確認位置,但這兩端標記呢,又不是隨便找的,而是和你要的那小段的兩端是一樣的,這樣廠家就能根據這兩端,再加上整條鏈子的特性來幫你生產複製你需要的那段了。pcr的引物起的就是這個作用。
不知道比喻的是否準確。。。希望你能明白。。。
PCR中的引物是什麼,PCR引物是什麼?
pcr引物又稱為寡核苷酸引物,也就是rna,是由人工合成的,分為兩種,引物1和引物2。由於dna聚合酶只能從核苷酸鏈的5 端到3 端進行復制,也就是隻能識別3 的尾端,而且只能把核苷酸連到已經和dna模板互補產生的多核苷酸鏈上,所以引物1和2分別於雙鏈dna的兩條鏈的尾部 就是末尾是3 端的那一邊 ...
PCR引物怎麼合成,引物是怎麼合成的
這是最重要的一步。理想的,只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件 1 足夠長,18 24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,並且降低產量 2 gc 40 60 3 5 端和中間序列要多gc,以增加穩定性 4 避免3 端g...
PCR擴增DNA的操作裡 為什麼要用引物?
因為dna聚合酶需要結合在雙鏈區域,才能啟動後續的脫氧核糖核苷酸的聚合作用。因此需要引物 pcr中是dna,而生物體內是rna 來構成雙鏈區,從而使dna聚合酶識別並結合,啟動聚合作用。設計所需擴增基因的引物,才能擴增出你所需要的片段啊,相當於一個特異的識別模板的部位,從而啟動你所需片段的複製。pc...