1樓:生熹
鹽析法——多用於各種蛋白質和酶的分離純化
在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出,這種方法稱為鹽析.常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等.各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及ph不同,故可用於對混和蛋白質組分的分離.
例如用半飽和的硫酸銨來沉澱出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉澱出來,鹽析沉澱的蛋白質,經透析除鹽,仍保證蛋白質的活性.調節蛋白質溶液的ph至等電點後,再用鹽析法則蛋白質沉澱的效果更好.鹽析法分為兩類,第一類叫ks分段鹽析法,在一定ph和溫度下通過改變離子強度實現,用於早期的粗提液;第二種叫b分段鹽析法,在一定離子強度下通過改變ph和溫度來實現,用於後期進一步分離純化和結晶.
影響鹽析的因素包括:蛋白質濃度、離子強度和型別、ph值、溫度等.針對溫度這一條,需要強調:
在低離子強度或純水中,蛋白質溶解度在一定範圍內隨溫度增加而增加.但在高濃度下,蛋白質、酶和多肽類物質的溶解度隨溫度上升而下降.在一般情況下,蛋白質對鹽析溫度無特殊要求,可在室溫下進行,只有某些對溫度比較敏感的酶要求在0-4℃進行.
使用硫酸銨沉澱蛋白需要注意:硫酸銨中常含有少量的重金屬離子,對蛋白質巰基有敏感作用,使用前必須用h2s處理:將硫酸銨配成濃溶液,通入h2s飽和,放置過夜,用濾紙除去重金屬離子,濃縮結晶,100℃烘乾後使用.
另外,高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性(ph=5.0左右),使用前也需要用氨水或硫酸調節至所需ph.
2.有機溶劑沉澱法——多用於生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化;
有機溶劑的沉澱機理是降低水的介電常數,導致具有表面水層的生物大分子脫水,相互聚集,最後析出.該法優點在於:1)分辨能力比鹽析法高,即蛋白質或其它溶劑只在一個比較窄的有機溶劑濃度下沉澱;2)沉澱不用脫鹽,過濾較為容易;3)在生化製備中應用比鹽析法廣泛.
但是,在常溫下,有機溶劑沉澱蛋白質往往引起變性.例如酒精消毒滅菌就是如此.因此,操作要求在低溫下進行.
有機溶劑的選擇首先是能和水混溶,使用較多的有機溶劑是乙醇、甲醇、丙酮,還有二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等.
3.等電點沉澱法——此法單獨應用較少,多與其它方法結合使用;
兩性電解質分子上的淨電荷為零時溶解度最低,不同的兩性電解質具有不同的等電點,以此為基礎可進行分離.如工業上生產胰島素時
2樓:生活需要化學
乙醇沉澱蛋白質是蛋白髮生變性析出,操作也就是把乙醇滴加到蛋白質溶液中去即可
蛋白和蛋白質的區別是什麼,蛋白和蛋白質的區別是什麼?
蛋白質是總稱,蛋白是分支,蛋白通常是具體的某一種或某一類蛋白質。例如 鉻蛋白 血紅蛋白 球蛋白等,而蛋白質則是所有各種蛋白的總稱。可以認為高蛋白食品就是蛋白質含量豐富的東西。蛋白質結構種類 纖維蛋白 fibrous protein 一類主要的不溶於水的蛋白質,通常都含有呈現相同二級結構的多肽鏈許多纖...
核苷酸和蛋白質的關係是什麼?核酸和蛋白質的關係是什麼?MRNA是什麼
冼秀雋 你好!核酸是有核苷酸一個一個連線起來組成的,就像蛋白質是由氨基酸一個一個連線而成的。你這裡說核苷酸和核酸與蛋白質的關係主要是因為遺傳物質染色體是由蛋白質和核酸構成的。mrna就是相當於遺傳物質的信使,細胞 時需要將遺傳物質進行復制好分到子細胞中,這個mrna就只指導遺傳物質dna進行復制,以...
還原性糖和蛋白質的檢驗,還原性糖和蛋白質的檢驗,
愛是地獄 在溶液中滴加班氏試劑,然後在酒精燈上加熱,如果生成磚紅色沉澱,則為還原性糖 先將雙縮脲試劑a加入組織樣液,搖盪均勻 必須營造鹼性環境 在加入雙縮脲試劑b,搖盪均勻。如果組織裡含有蛋白質,那麼會看到溶液變成紫色。 答 1 還原性糖用班氏劑或用斐林試劑檢驗,加熱生成磚紅色沉澱。2 蛋白質用雙脲...