1樓：阿魯巴星人
你這個詳細的，可以詳細成一本書了，我就粗略給你說說哈~
先理解個概念，你所說的一個病毒載體是不能進行病毒包裝的，病毒包裝時還需要多個輔助質粒才行。病毒包裝所需要的蛋白等其他關鍵元件都在輔助質粒上。
首先，pcr目的基因連線病毒載體後，病毒為什麼還要包裝，包裝的目的是什麼？
病毒載體構建完成後，可以不進行包裝，直接轉染細胞，也可以到達構建穩轉株或者基因敲除的效果，但是效率非常低，因為有些細胞非常難轉染。所以要先轉染好轉染的細胞，包裝成病毒，然後再感染相應的靶細胞，就可以達到較好的效果。
其次，包裝後的病毒為什麼就被宿主細胞釋放出來後，轉染新的宿主細胞就不會導致新的宿主細胞的死亡？
你病毒加多了，也會導致細胞的死亡，或者病毒所攜帶的外源基因對宿主細胞有毒性，更會導致細胞狀態不佳，甚至死亡。而包裝後的病毒感染細胞是一次性的，感染宿主細胞後，不能進行再次包裝。這是為了實驗安全性考慮。
2樓：匿名使用者
病毒需要包裝後才能侵染，新的宿主細胞中，病毒的基因組被整合到了細胞基因組中，形成融源狀態，所以不會使宿主死亡
基因重組技術有哪幾個方面的應用
3樓：智障班班長
應用：一、抗蟲棉花就是將蘇雲金芽孢桿菌中的殺蟲蛋白基因轉移到棉花中，從而能夠專一性抑制棉鈴蟲發生，減少棉鈴蟲危害，減少農藥使用，實現穩產增產、提質增效。
二、2023年，美國食品藥物管理局（fda）批准利用轉基因微生物生產的人胰島素商業化生產，是世界首例商業化應用的轉基因產品。
轉基因技術在工業中的應用也有長久歷史，如利用轉基因工程菌生產食品用酶製劑、新增劑和洗滌酶製劑等。此外，轉基因技術還廣泛應用於環境保護和能源領域，如汙染物的生物降解以及利用轉基因生物發酵燃料酒精等。
擴充套件資料
從轉基因技術在作物育種上的應用與實踐來看，隨著科學技術進步，育種技術從最初的自然馴化、人工選擇、人工誘變、雜交育種，逐步發展到現在的分子標記輔助育種、分子設計育種和轉基因育種技術。
這一技術從一個生物體中提取結構明確、功能清楚的基因轉移到另一個生物體，打破了物種界限實現基因轉移，拓寬了遺傳資源利用範圍，更為精準、高效和可控。
重組dna技術包括哪些主要步驟
4樓：轉折點
重組dna技術主要包括四個步驟：提取目的基因、目的基因與運載體結合、將目的基因匯入受體細胞、目的基因的檢測和表達。
1、提取目的基因
獲取目的基因主要有兩條途徑：一條是從供體細胞的dna中直接分離基因；另一條是人工合成基因。直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。
2、目的基因與運載體結合
目的基因與運載體結合的過程實際上是不同**的dna重新組合的過程，是基因工程的核心。
3、將目的基因匯入受體細胞
用人工方法使體外重組的dna分子轉移到受體細胞，主要是借鑑細菌或病毒侵染細胞的途徑。目的基因匯入受體細胞後，就可以隨著受體細胞的繁殖而複製，由於細菌的繁殖速度非常快，在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。
4、目的基因的檢測和表達
目的基因匯入受體細胞後，是否可以穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑑定才能知道。受體細胞必須表現出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達過程。
擴充套件資料
重組dna技術是指將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進行拼接重組，然後轉入另一種生物體（受體）內，使之按照人們的意願穩定遺傳並表達出新產物或新性狀的dna體外操作程式，也稱為分子克隆技術。因此，供體、受體、載體是重組dna技術的三大基本元件。
重組dna技術使用的酶有限制性核酸內切酶、dna連線酶。常用的載體有質粒載體、噬菌體載體、ti質粒、人工染色體。
5樓：北京索萊寶科技****
dna重組技術步驟如下：
一、質粒dna
提取的pqe-31和puc18-cat 質粒。
二、製備重組dna
1. 在滅菌的1.5ml 離心管中，加入pqe-31質粒10ml(2mg／ml)，2ml酶切緩衝液，1ml bamhi 和hindiii酶 的混合液（各含10個單位），無菌雙蒸水7ml，至反應混合物總體積為20ml，離心混勻，37℃反應過夜。
2. 在另一無菌1.5ml 離心管中，加puc18-cat 質粒20ml，加入3ml酶切反應液，lml bamhi和hindiii酶的混合液，無菌雙蒸水補到30ml，37℃反應過夜。
3. 反應完畢後取5ml pqe-31質粒的酶切液做電泳分析，檢驗酶切是否完全。酶切完全，進行下一步。
4. 將酶切處理的後pqe-31和puc18-cat 質粒，分別上樣跑瓊脂糖凝膠電泳（注意加dna分子量標準）。電泳結束後用dna瓊脂糖膠純化試劑盒按照試劑盒說明書的方法**dn**段。
前者**的片段為3.5kb，後者為650bp。
5. 將**的pqe-31載體質粒均分為兩份，其中一份與酶切後**的cat片段混合，做連線；另一份不加cat片段，做對照。操作如下：
在10ml dna樣品中，加t4 dna連線酶緩衝液1ml，t4 dna連線酶1ml，14℃（室溫）過夜，然後做大腸桿菌的轉化。
三、轉化感受態細胞
1. 製備的感受態細胞(-20℃儲存的)。
2. 在100ml的融化後處於冰浴的感受態細胞中，加入10ml連線產物，混勻，冰上放置30分鐘，以後的操作參照實驗一進行。同時做未加cat片段的空白pqe-31載體質粒連線處理後的感受態細胞轉化的對照。
實驗結果
過夜培養後，實驗組和對照組的兩個培養皿上都可能會出現一些菌落。如果實驗組的菌落數明顯多於對照組的菌落，則是好徵兆，但實驗組中出現的菌落是否含有所需的dna重組子還須進一步鑑定。
6樓：義翹神州加油
重組dna技術一般包括以下幾步：
獲得目的基因;
與克隆載體連線，形成新的重組dna分子;
用重組dna分子轉化受體細胞，並能在受體細胞中複製和遺傳;
對轉化子篩選和鑑定;
對獲得外源基因的細胞或生物體通過培養，獲得所需的遺傳性狀或表達出所需要的產物。
在具體工作中選擇哪條技術路線主要取決於基因的**、基因本身的性質和該項遺傳工程的目的。
7樓：匿名使用者
提取目的基因，目的基因與運載體結合。將目的基因匯入受體細胞。目的基因的檢測和表達。
8樓：匿名使用者
pcr擴增，**，酶切，連線，轉化，提質粒
基因克隆的基本步驟有哪些
9樓：莫彷徨
選擇目的基因,並設計相應引物；
用引物pcr擴增目的基因片段；
選擇合適（抗性標記、酶切位點等）的克隆載體（為了保真擴增）,並將pcr片段連線入克隆載體中；（一般用taq酶的pcr產物在末尾會自帶一個a,可在solution 1作用下與兩端各帶一個t的線性t載體直接相連）
將連線產物轉化入感受態大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養基上生長擴增；
從大腸桿菌中提取質粒（即前面的連線產物）,酶切鑑定和測序鑑定均無誤後將目的基因片段切下並與新的表達載體連線,然後再次轉化入大腸桿菌中擴增,再提質粒,即得到想要的目的基因片段克隆.
動物基因工程載體匯入受體細胞要篩選嗎
10樓：沙古利費斯
不用，基因匯入載體時才要篩選。
11樓：刀劍信譽
基因工程的基本操作程式：
1、目的基因的獲取
（1）目的基因是指： 編碼蛋白質的結構基因。
（2）獲取方法：①從基因文庫中獲取；②人工合成（反轉錄法和化學合成法）；③pcr技術擴增目的基因。
2、基因表達載體的構建
（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。
（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。如圖：
①啟動子：是一段有特殊結構的dn**段，位於基因的首端，是rna聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mrna，最終獲得所需的蛋白質。
②終止子：也是一段有特殊結構的dn**段，位於基因的尾端。
③標記基因的作用：是為了鑑定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。
（3）基因表達載體的構建過程：
3、將目的基因匯入受體細胞
（1）轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，並且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。
（2）常用的轉化方法：
生物種類 植物細胞 動物細胞 微生物細胞
常用方法 農桿菌轉化法 顯微注射技術 ca2+處理法
受體細胞 體細胞 受精卵 原核細胞
轉化過程 將目的基因插入到ti質粒的t-dna上→農桿菌→匯入植物細胞→整合到受體細胞的dna→表達 將含有目的基因的表達載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發育→獲得具有新性狀的動物 ca2+處理細胞→感受態細胞→重組表達載體與感受態細胞混合→感受態細胞吸收dna分子
（3）重組細胞匯入受體細胞後，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。
4、目的基因的檢測和表達
（1）首先要檢測轉基因生物的染色體dna上是否插入了目的基因，方法是採用dna分子雜交技術。
（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出mrna，方法是用標記的目的基因作探針與mrna雜交。
（3）最後檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交。
（4）有時還需進行個體生物學水平的鑑定。如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。
知識點撥：
1、構建基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便於獲得所需的目的基因。
2、pcr技術：是一項在生物體外複製特定dn**段的核酸合成技術。pcr擴增是獲取目的基岡的一種非常有用的方法，也是進行分子鑑定和檢測的一種很靈敏的方法。
目的：通過指數式擴增獲取大量的目的基因。
3、基因文庫中不是直接保管相應基因，基因文庫中的基因儲存在受體菌中。
4、在基因工程的四個操作步驟中，只有第三步將目的基因匯入受體細胞不需鹼基互補配對，其餘三個步驟都涉及鹼基互補配對。
5、原核生物繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，有利於目的基因的複製與表達，因此常用大腸桿菌等原核生物作為受俸細胞。
6、植物細胞的全能性較高，可經植物組織培養過程成為完整植物體，因此受體細胞可以是受精卵也可以是體細胞；動物基因工程中的受體細胞一般是受精卵。
7、轉化的實質是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中，從而使受體生物獲得了新的遺傳特性的現象，從其變化的實質看，這種變異屬於可遺傳變異中的基因重組。
知識拓展：
1、基因文庫的構建：
（1）概念
①基因組文庫：含有一種生物的全部基因。將含有某種生物不同基因的許多dn**段，匯入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因組文庫。
②cdna文庫：只包含了一種生物的部分基因。
（2）構建過程
基因組文庫的構建 cdna文庫的構建
2、人工合成目的基因
（1）反轉錄法：
（2）人工合成目的基因
3、pcr技術擴增目的基因
①原理：dna雙鏈複製
②過程：
第一步：加熱至90～95℃dna解鏈；
第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補dna鏈；
第三步：加熱至70～75℃，熱穩定dna聚合酶從引物起始互補鏈的合成。
如何利用PCR技術鑑定轉基因植物
根據目的基因設計引物，然後提取植物基因組dna，進行擴增，看能夠擴到目的基因 從轉基因植物體細胞中，取出樣本核酸。在pcr中用來鑑定的核酸用熒光蛋白，或者同位素標記。然後將樣本放入pcr中，進行擴增。注意哦，pcr裡面的標記好的核酸，都有唯一對應的鹼基對，這鹼基對，是我們理論上的，所以肯定知道的。如...
轉基因技術與基因工程有何區別，基因工程和轉基因技術有什麼區別和聯絡？
將人工分離和修飾過的基因匯入到生物體基因組中，由於匯入基因的表達，引起生物體的性狀的可遺傳的修飾，這一技術稱之為轉基因技術。轉基因技術是基因工程的一種手段和方法 浙大阿米巴 轉基因技術是基因工程的一個方法。還不夠清楚啊？人為改造基因的過程都可以叫基因工程 其中我們常用轉基因技術，比如把某種植物產生的...
基因鑑定為什麼先要經過pcr技術 不可以直接進行鑑定嗎
基因鑑定時一定要先經過pcr技術，直接進行鑑定是不行的。基因鑑定技術是一項生物學檢測技術，人體細胞有總數約為30億個鹼基對的dna，每個人的dna都不完全相同，人與人之間不同的鹼基對數目達幾百萬之多，因此通過分子生物學方法顯示的dna圖譜也因人而異，由此可以識別不同的人。所謂 dna指紋 就是把dn...