1樓:
是的,標準曲線法是絕對定量法
不是,既然用到了內參,就是相對定量了
反轉錄的時候按照試劑盒的要求轉錄特定質量的rna(rna的濃度可以通過分光光度計測定),反轉完後按照推薦的比例稀釋產物即可,一般確保你要的基因的ct值在20~25比較理想
對於同一類生物樣本,提取三份rna(每份rna都應包含若干不同的生物個體)並反轉錄,分別q,這叫生物學重複;q同一個基因的時候平行3個加樣孔,這叫技術重複
2樓:匿名使用者
濃度梯度是用來做標準曲線的,對於你沒有使用過的引物,做一次相對定量的標準曲線,可以計算出你引物的擴增效率,你檢查10個基因,如果做相對定量的話,每個基因的檢測引物的擴增效率都應該是一樣的,這樣項規定量的數學模型才能成立,cdna的模板濃度這個隨意性很大,主要是你要檢測的目的基因,如果你的目的基因濃度很低,你的總cdna的用量肯定要比標準的多,反之亦然。等到你所有的實驗條件都優化好了在考慮三個生物學重複吧。
請教real-time pcr標準曲線製作
3樓:南京金益柏生物科技****
相對定量的時候並不需要標準曲線
只有絕對定量需要標準曲線
標準曲線目的基因和內參需要一起跑,否則沒有意義~從圖上看你的稀釋範圍不太夠,我們一般從10的-2 一直做到10的-9
qrt-pcr加cdna的量,怎麼加
4樓:阿魯巴星人
因為你所要檢bai測的目的片段丰度du不同,zhi所以需要先做個預實驗dao。
怎麼做呢?
你先把版cdna進行梯度稀釋,然
權後進行pcr,如果你的primer所擴增的ct值在15-25之間,那麼就是很不錯的稀釋梯度啦~
以後實驗久按照這個濃度加就好了
qrt-pcr中內參是什麼?一個內參夠不夠
5樓:匿名使用者
內參基因也稱為管家基因。理論上,其表達一直都很恆定,很少受外界影響。這種基因的表達也稱之為組成性表達。
熒光定量pcr中標準曲線相關係數r2過小怎麼回事
6樓:匿名使用者
標準曲線看斜率之抄前,先要看bai
線性 (幾個標準點du是否在一條直線上)zhi,關鍵指標是決定係數r2。如果r2在0.98以下,看dao斜率是沒有意義的。
造成標準曲線不直的原因如果是你移液技術不好,你只好重做。
7樓:匿名使用者
重複性不好,及梯度稀釋不準確,造成的線性化不好
real-time pcr相對定量2 -△△ct法中用來判斷擴增效率的標準曲線怎麼製作?
8樓:又被百爺封了
你好,這個要在開始的時候選擇「相對定量」模式,軟體才會給出擴增效率
9樓:滾遠點兒
擴增效率e=10-1/斜率-1,其中斜率為標準曲線的斜率
怎麼用excel製作標準曲線圖,如何用Excel製作曲線圖
別刪我回答了 這個應該在中二級考試應該就會考的這種東西。 沐雨莀風 想用excel製作標準曲線圖的話,這個你可以先將它的稜斯達克,然後開啟它的圖表就可以做出來了 陽光的小朱 第二,製圖示準的這個路線圖的話,標準的曲線圖還是得用專門的測繪工具來進行測量,經測繪製作 我要一個用excel製作標準的曲線圖...
N 乙醯氨基葡萄糖標準曲線,葡萄糖標準曲線的製作方法
看你用的是哪種方法了,我只查到這些 dnsl 酒石酸鉀鈉182.0 g,溶於500 ml蒸餾水中。加熱,依次加入dns 6.3 g,naoh 21.0 g,苯酚5.o g,攪拌至完全溶解,冷卻後用蒸餾水定容至1000 ml,貯於棕色瓶中。室溫儲存備用。dns2 dns 6.5 g溶於少量水中 移人1...
excel中標準方差和標準偏差有區別嗎?它們的函式分別是什麼
沒有標準方差的概念,只有方差和標準偏差 一般計算都是用的標準偏差,但叫法比較亂,有人叫標準差,均方差什麼的,雖然有的名稱並不對,其實還是指的是標準偏差 未開根號的叫方差,開了叫標準差 在excel中,方差是var 標準偏差是stdev 函式裡解釋是基於樣本,分母是除的n 1 還有個varp 和std...