qRT PCR中標準曲線製作及濃度梯度問題

時間 2021-08-11 18:15:19

1樓:

是的,標準曲線法是絕對定量法

不是,既然用到了內參,就是相對定量了

反轉錄的時候按照試劑盒的要求轉錄特定質量的rna(rna的濃度可以通過分光光度計測定),反轉完後按照推薦的比例稀釋產物即可,一般確保你要的基因的ct值在20~25比較理想

對於同一類生物樣本,提取三份rna(每份rna都應包含若干不同的生物個體)並反轉錄,分別q,這叫生物學重複;q同一個基因的時候平行3個加樣孔,這叫技術重複

2樓:匿名使用者

濃度梯度是用來做標準曲線的,對於你沒有使用過的引物,做一次相對定量的標準曲線,可以計算出你引物的擴增效率,你檢查10個基因,如果做相對定量的話,每個基因的檢測引物的擴增效率都應該是一樣的,這樣項規定量的數學模型才能成立,cdna的模板濃度這個隨意性很大,主要是你要檢測的目的基因,如果你的目的基因濃度很低,你的總cdna的用量肯定要比標準的多,反之亦然。等到你所有的實驗條件都優化好了在考慮三個生物學重複吧。

請教real-time pcr標準曲線製作

3樓:南京金益柏生物科技****

相對定量的時候並不需要標準曲線

只有絕對定量需要標準曲線

標準曲線目的基因和內參需要一起跑,否則沒有意義~從圖上看你的稀釋範圍不太夠,我們一般從10的-2 一直做到10的-9

qrt-pcr加cdna的量,怎麼加

4樓:阿魯巴星人

因為你所要檢bai測的目的片段丰度du不同,zhi所以需要先做個預實驗dao。

怎麼做呢?

你先把版cdna進行梯度稀釋,然

權後進行pcr,如果你的primer所擴增的ct值在15-25之間,那麼就是很不錯的稀釋梯度啦~

以後實驗久按照這個濃度加就好了

qrt-pcr中內參是什麼?一個內參夠不夠

5樓:匿名使用者

內參基因也稱為管家基因。理論上,其表達一直都很恆定,很少受外界影響。這種基因的表達也稱之為組成性表達。

熒光定量pcr中標準曲線相關係數r2過小怎麼回事

6樓:匿名使用者

標準曲線看斜率之抄前,先要看bai

線性 (幾個標準點du是否在一條直線上)zhi,關鍵指標是決定係數r2。如果r2在0.98以下,看dao斜率是沒有意義的。

造成標準曲線不直的原因如果是你移液技術不好,你只好重做。

7樓:匿名使用者

重複性不好,及梯度稀釋不準確,造成的線性化不好

real-time pcr相對定量2 -△△ct法中用來判斷擴增效率的標準曲線怎麼製作?

8樓:又被百爺封了

你好,這個要在開始的時候選擇「相對定量」模式,軟體才會給出擴增效率

9樓:滾遠點兒

擴增效率e=10-1/斜率-1,其中斜率為標準曲線的斜率

怎麼用excel製作標準曲線圖,如何用Excel製作曲線圖

別刪我回答了 這個應該在中二級考試應該就會考的這種東西。 沐雨莀風 想用excel製作標準曲線圖的話,這個你可以先將它的稜斯達克,然後開啟它的圖表就可以做出來了 陽光的小朱 第二,製圖示準的這個路線圖的話,標準的曲線圖還是得用專門的測繪工具來進行測量,經測繪製作 我要一個用excel製作標準的曲線圖...

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