SDS PAGE電泳染色問題,SDS PAGE電泳遇到的問題。

時間 2021-08-30 09:01:19

1樓:

條帶變黃這個現象沒有碰到過,什麼叫底部條帶變成黃色,其它條帶呢?有正常的麼?染色分快染和慢染,快染做法是先用染色液進行染色1h左右,如果嫌麻煩就在微波爐里加熱30s,再染30分鐘左右的樣子就可以了,然後進行脫色,1小時內更換三次脫色液,基本就可以清楚的看到條帶了。

慢染是先用脫色液進行15脫色,再在脫色液中加入少量染色液,可以染色過液,這樣做的好處是非常省脫色液。之前什麼固色這些過程我沒采用過,所以沒有進行過對比。不過一般染色應該用r250,g250一般用做蛋白質的定量分析。

這裡介紹了g250和r250的區別。試劑和染料時間久一點沒什麼關係,緩衝液1-2星期重新配製一次,否則tris緩衝液ph值容易變化,會對跑膠結果有影響,具體還有什麼問題可以再討論,因為你給的資訊比較少不好做分析。

2樓:玫瑰_薄荷

貌似固定液時間太短了,一般2h以上

變黃的話可能是蛋白自身有一定的問題,也有可能是配膠時有誤(但概率不大)

脫色時1天要換脫色液2-3次的

緩衝液之類的最好還是現配現用,而且試劑要冷藏。染料應該沒多大關係的。

3樓:

怎麼可能染一夜色,時間太長了。你上網再查查染色的時間吧。

變黃不知為什麼,沒遇到過,但既然底部有條帶,膠體和跑帶應該沒問題吧

westernblot電泳後,為什麼要考馬斯亮藍染色,直接轉膜不行嗎?謝謝!

4樓:匿名使用者

wb的膠用考馬斯亮藍染色,有為了確定你的目的條帶電泳情況目的,還有一個目的,就是跟用麗春紅染摸一樣的作用,看轉膜的效率。也就是看你的目的條帶是否都轉移到你的膜上了。

這步染色完全可以省略,一般都可以用預染marker來進行轉膜觀察,另外考馬斯亮藍與蛋白結合後,很難再去除。

5樓:匡雅霜

可以啊。

一般只是用考馬斯亮藍進行預染,提前看一下粗略的結果,不然等westernblot的結果出來基本要第二天了。所以不染色直接轉膜沒問題。

sds-page電泳遇到的問題。

6樓:匿名使用者

3個方面,電泳儀、緩衝液、膠

電泳儀你可以換一臺好的試一下,如果跑出來還這樣,下一步,如果好了,那麼要麼你設定出了問題,電壓電流什麼的,要麼儀器壞了。。

緩衝液注意ph 以及sds的量,可以換一瓶試一下,比如別人配的...如果還是有問題下一步,如果好了,那麼...呵呵,話說你可以blame天平~~

膠如果配稀了或者沒凝好也可能是彌散的...換塊膠吧....

最後說一下 條帶越跑越寬是必然的,條帶最後終歸會有部分彌散,就看你需要跑多少大小的蛋白,一般120v恆壓65min10%或8%的膠30kda以上都不會太彌散,如果你確實需要分離小蛋白,請使用glycine-sds-page,protocol自己上ncbi搜~~望實驗順利~~

7樓:匿名使用者

有三方面原因:電泳儀、緩衝液、膠

1.電泳儀你可以換一臺好的試一下,如果跑出來還這樣,下一步,如果好了,那麼要麼你設定出了問題,電壓電流什麼的,要麼儀器壞了。。

2.緩衝液注意ph 以及sds的量,可以換一瓶試一下,比如別人配的...如果還是有問題下一步,如果好了,那麼...呵呵,話說你可以blame天平~~

3.膠如果配稀了或者沒凝好也可能是彌散的...換塊膠吧....

8樓:匿名使用者

試一下將開始電壓設較低的值;

配好的分離膠,老化時間加長一些,避免不均勻。。

sds page電泳出現問題,SDS PAGE電泳問題,急!!!!!

電泳的那個問題是不是你點dna液的時候沒點好,要麼就是通電的電壓沒調好 脫色沒完全退色是正常的,看的清楚就可以了 補充 那就有可能你的dna沒提的很純,電泳分離不開來 再做遍吧,我跑過兔子跟河蚌的 應該是這個問題 1.上樣量不能太多 2.點樣孔要清潔,樣品要沉到底部形成一條帶3.濃縮膠低電壓跑 4....

SDS PAGE電泳遇到的問題,關於SDS PAGE電泳的問題

3個方面,電泳儀 緩衝液 膠 電泳儀你可以換一臺好的試一下,如果跑出來還這樣,下一步,如果好了,那麼要麼你設定出了問題,電壓電流什麼的,要麼儀器壞了。緩衝液注意ph 以及sds的量,可以換一瓶試一下,比如別人配的.如果還是有問題下一步,如果好了,那麼.呵呵,話說你可以blame天平 膠如果配稀了或者...

SDS PAGE蛋白電泳配膠不凝固

我分析原因是過硫酸胺失效,過硫酸氨最好是先用現配,如果怕麻煩而且跑膠的頻率很高的話,那麼用完之後ap要放在4 儲存,一週之後必須新配。另外可以適當的增加temed的量,從5 l提高到8 l並無大礙。如你所說,是不是就是ap失效呢,還有,我強烈建議你複查一邊濃縮膠,分離膠各各buffer的組分是否配製...