1樓：始桂枝閔嬋
首先,分光光度計測量的樣品必須是均一的,搖勻後再測量結果會準確些.它是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器.
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能.可以定量溶於緩衝液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈dna,以及rna.核酸的最高吸收峰的吸收波長260
nm.每種核酸的分子構成不一,因此其換算係數不同.定量不同型別的核酸,事先要選擇對應的係數.如：1od
的吸光值分別相當於50μg/ml的dsdna,37μg/ml的ssdna,40μg/ml的rna,30μg/ml的olig.測試後的吸光值經過上述係數的換算,從而得出相應的樣品濃度.測試前,選擇正確的程式,輸入原液和稀釋液的體積,爾後測試空白液和樣品液.
然而,實驗並非一帆風順.讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題.靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大.
事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定範圍內變化,即儀器有一定的準確度和精確度.如eppendorf
biophotometer的準確度≤1.0%（1a）.這樣多次測試的結果在均值1.
0%左右之間變動,都是正常的.另外,還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩衝液的ph值,離子濃度等：在測試時,離子濃度太高,也會導致讀數漂移,因此建議使用ph值一定、離子濃度較低的緩衝液,如te,可大大穩定讀數.
樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品.這些小顆粒的存在干擾測試效果.
為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大於0.1a,吸光值最好在0.1-1.
5a.在此範圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定.從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高（超過光度計的測試範圍）.
最後是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值；混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大；換算係數和樣品濃度單位選擇一致；不能採用視窗磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項.
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如a260/a280的比值,用於評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm.純淨的樣品,比值大於1.8（dna）或者2.
0（rna）.如果比值低於1.8
或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響.a230表示樣品中存在一些汙染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純淨的核酸a260/a230的比值大於2.
0.a320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子.純樣品,a320一般是0.
2樓：律全勵溪
1.a260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波長，最佳測量值的範圍為0.1至1.0。
如果不在此範圍，稀釋或濃縮樣品，使之在此範圍內；如果吸光度小於0.05，檢查是否存在操作因素（如移液不準確，樣品內有懸浮物等）影響。dna樣品的a260
吸光度值是否》0.1。（請注意，這個值跟儀器無關，核酸的吸光度必需大於0.1，其值才有效和可靠，因為樣品中的雜質和顆粒這些不純物的干擾通常會對光有一定吸收，其值<0.1）；
朗伯－比爾定律：
a吸光值
i0入射光強度
i投射光強度
c吸光物質的摩爾濃度（mol/l）
d光通過的液層厚度（cm）
ε摩爾吸光係數（lmol-25px-1）
2.a280nm
是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純dna的a260/a280比值為1.8，純rna為2.
0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質的汙染，需要純化樣品。比值=1.
5相當於50％蛋白質/dna溶液
3.a230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純dna和
rna的a260/a230比值為2.5。若比值小於2.0標明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑汙染，需要純化樣品。a230產生負值主要是由於在很低dna
濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導致的。在下一個測定中，需要降低樣品的稀釋度，a230的負值會被校正。
4.a320nm或a340nm
為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0。如果不是，標明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的a320一般是
0。5.a260/a280和a260/a230
是核酸純度的指示值，純度好的dna，在ph7-8.5
下其比值應該在2.0
或2.5，a260
/a280的比值，用於評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280
nm。純淨的樣品比值大於1.8（dna）或者2.0（rna）。如果比值低於1.8
或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。
a230是多肽、芳香基團、苯酚和一些碳氫化合物的吸光度，a230表示樣品中存在一些汙染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，較純淨的核酸a260/a230的比值大於2.0
。a280是蛋白質的吸光度。
3樓：邢有福橋裳
a230/a260的比值可判斷樣品的純度。純dna的a230/a260應大於1.8，純rna應達到2.0。樣品中如含有雜蛋白及苯酚，a230/a260比值明顯降低。
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