1樓：
色譜法的最早應用是用於分離植物色素，其方法是這樣的:在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素(植物葉的提取液)的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現幾種顏色的混合譜帶。
然後用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，並逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續沖洗就可分別接得各種顏色的色素，並可分別進行鑑定。色譜法也由此而得名。
但其分離的原理仍然是一樣的。我們仍然叫它色譜分析。
操作規程
一、液相色譜要放置在平穩牢固的檯面上。
二、液相色譜要有可靠的接地。
三、高壓氣瓶要放置在陰涼、通風處，通過減壓閥和機器連線。
四、使用氫火焰時，應先開助燃氣，後開氫氣，關閉時應先關氫氣，後關助燃氣。注意檢查氫瓶、減壓 閥、連線管線是否洩漏，如有洩漏應立即處理。
五、溫控裝置，壓力錶應按規定進行檢定。
六、儀器工作室，應放置足夠數量的消防器材。
2樓：t信念
1． 電源準備
開啟穩壓器電源開關，須待電壓指示至 220v 後，才能開啟其他有關裝置。
2．lc-600高效液相色譜儀的準備
試劑：三氟乙酸
乙腈超純水（millipore 超純水）
冰乙酸溶液配置：貯液瓶與流動相的準備
a 液 0.1%三氟乙酸 （三氟乙酸 1ml，超純水 999ml）室溫儲存
b 液 60%乙腈 （乙腈 600ml， 超純水 400ml）室溫儲存
樣品液 0.01%乙酸 （冰乙酸 10 l 超純水 100ml）室溫儲存
泵頭沖洗液：精濾後超純水或者是 1%色譜純甲醇 室溫儲存
注：貯液瓶應用超純水淌洗乾淨，備用。
流動相溶劑用潔淨 g4 玻沙漏斗精濾除去微小顆粒（目前未濾過溶液）。
操作者必須清楚並註明 a、b 貯液瓶盛裝為何種溶劑。
衝 洗 泵 頭 ： 用 注 射 管 於 軟 塑 料 管 末端 抽 吸 至 有 水 流 出 ， 調 節 流 速 開 關 控 制 流 速 為20-30drop/min.（
① 流動相管道排氣
如果，管道中氣泡較多，可通過彈擊管道，排除氣泡，並逆時針旋轉脫氣泵活塞使其鬆動，用注射管於流動相出口的塑料管末端抽吸至管道內氣泡排除完全。操作時，我們通常已經開啟了脫氣機（氣泡嚴重影響分離效果，所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。）
② 開機
③ 進入lc-600高效液相色譜儀作業系統
④ 資料記錄的終止與儲存
3． 關機
1）n2000色譜工作站的關閉
在 n2000的主操作介面上分別單擊關閉泵、檢測器圖示，或通過選單關閉。關閉電腦主機及顯示器。將所有使用儀器用布蓋好。關閉排氣扇、空調與穩壓器開關。
2） 清潔衛生
實驗完畢後，打掃儀器室桌面與地面清潔，保持桌面整潔。
3） 儀器使用記錄
記錄當天的儀器使用情況於指定記錄本上，包括儀器使用起止時間與出現問題的解決方案，並簽上操作者的名字.以上為－－-液相色譜儀的使用方法
3樓：匿名使用者
現在一般說的就是高效液相色譜（hplc），原理如下文，但具體的操作就要看具體的儀器了，因為國內外的不同廠家生產的操作方案可能有所不同，而且你去面試要使用hplc的話建議你最好先去找臺能使用的熟悉下，畢竟這玩意的**不是一般的。而有些普通的液相色譜就很簡單了，只要你看懂了原理就能進行操作，沒有什麼特別的難度。
液相色譜法簡介
氣相色譜不能由色譜圖直接給出未知物的定性結果，而必須由已知標準作對照定性。當無純物質對照時，定性鑑定就很困難，這時需藉助質譜、紅外和化學法等配合。另外大多數金屬鹽類和熱穩定性差的物質還不能分析。
此缺點可高效液相色譜法來克服。在經典液相色譜的基礎上，引入了氣相色譜的理論與技術，在70年代初建立了高效液相色譜分析法（以hplc表示）。在常壓下操作的液相色譜，分離一個樣品往往長達幾小時至幾十小時，因此工作效率很低。
人們曾對這種經典液相色譜法試用了柱前加壓或柱後減壓的辦法來提高流速，以縮短分離時間，但是結果失敗了。根據液相色譜理論，因為隨著載液（流動相）流速的提高，板高則增大，所以柱效會顯著降低。隨著生產技術的提高，人們製成了細小（<10μm）而高效的填充物，從而使柱效大大提高。
但是隨著填充物粒度的減小，柱壓降顯著增大，為了得到合理的載液流速，使用了高壓；輸液泵，使流速達到1～10ml/min。從而使分析一個多組分樣品只需幾分鐘到幾十分鐘時間。隨著高效固定相、高壓泵和高靈敏度檢測器以及電子技術和計算機技術的應用，70年代以業逐步實現了液相色譜分析的高效、高速、高靈敏和自動化操作。
因此人們常稱它為高效液相色譜或現代液相色譜，以區別於經典液相色譜。高效液相色譜法的分類與經典液相色譜法一致。按固定相的聚集狀態不同分為液固色譜法和液液色譜法。
按分離原理不同分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜法四類。
高效液相色譜所用基本概念：
保留值等色譜分析有關術語，以及分配係數、分配比、塔板高度、分離度、選擇性等方面均與氣相色譜相一致；高效液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率理論也與氣相色譜一致。因液相色譜以液體代替氣相色譜中的氣體作流動相，則速率議程h=a+b/?
+c?。式中：縱向擴散項（分子擴散項）b/?
對板高的影響與氣相色譜不同，由於液相色譜中組分分子在流動相中的擴散係數dm僅為氣相色譜中的萬分之一，因此縱向擴散項對板高的影響可以忽略不計。於是影響液相色譜的主要因素是傳質項cu。由圖14—可知，氣相色譜（gc）的流動相流速u增大時，板高h顯著增大（即柱效顯著降低），而液相色譜（lc）的流速增大時，板高增大不顯著（即柱效降低不顯著）。
這說明高效液相色譜也有很高的分離效能，此外，氣相色譜的載氣權數種，其性質差別也不大，對分離效果影響也不大。而液相色譜的載液種類多，性質差別也大，對分離效果影響顯著。因此流動相的選擇很重要，並且在選擇流動相對應注意以下幾點：
流動相對樣品有適當的溶解度，但不與樣品發生化學反應，也不與固定液互溶；流動相的純度要高（至少分析純）、粘度要小，以免帶進雜質和組分在流動相中擴散係數下降；流動相應與所用檢測器相匹配，不應對組分檢測產生干擾作用。高效液相色譜不但具有高效、高速、高靈敏度的特點，還由於它的流動相（載液）種類比氣相色譜的流動相（載氣）多，因此可選用兩種或多種不同比例的液體作流動相，從機時可提高選擇性。此外，液相色譜的餾分比氣相色譜易於收集。
便於為紅外、核磁等方法確定化合物結構提供純樣品。由於高效液相色譜法具有以上特點，它適於分離、分析沸點高、熱穩定性差、分子量大（大於400）的氣相色譜法不能或不易分析的許多有機物和一些無機物，而這些物質佔化合物總數的75～80%。因此它已廣泛用於核酸、蛋白質、氨基酸、維生素、糖類、脂類、甾類化合物、激素、生物鹼、稠環芳烴、高聚物、金屬螯合物、金屬有機化合物以及多種無機鹽類的分離和分析。
但是，高效液相色譜的固定相的分離效率、檢測器的檢測範圍以及靈敏度等方面，目前還不如氣相色譜法。此外對於氣體和易揮發物質的分析方面也遠不如氣相色譜法，因此高效液相色譜法和氣相色譜法配合使用可互相取長補短，相輔相成。
1.分離原理
凝膠色譜，又稱空間排阻色譜。它是利用某些凝膠對混合物各組分因分子量不同，其阻滯作用也不同而進行分離、分析的方法。凝膠色譜的分離要理和其它色譜法不同，它類似於分子篩的作用，但凝膠的孔徑要比分子篩大得多，一般為幾百至幾千埃。
色譜柱內填充具有一定大小孔穴的凝膠。當樣品進入色譜柱後，不同大小的樣品分子（圖14—2中以黑點表示）隨流動相沿凝膠顆粒（圖14—2中以空心圈表示）外部間隙和凝膠孔穴旁流過，體積在的分子因不能滲透到凝膠孔穴裡而得到排阻，因此較為順利地通過凝膠柱而較早地被流動相沖洗出來。中等體積的分子產生部分滲透作用，小分子可滲透到凝膠孔穴裡去而受阻滯，因有一個平衡過程而較晚地被流動相沖洗出來。
這樣，試樣組分基本上按分子大小受到不同阻滯而先後流出色譜柱，從而實現分離目的。光凝膠色譜採用水溶液作流動相進，稱為過濾凝膠色譜（hfc），而用有機溶劑為流動相時，稱為凝膠滲透色譜（gpc）。
2．固定相
凝膠色譜的固定相凝膠，是含有大量液體（一般是水）的柔軟而富於彈性的物質，是一種經過交聯而具有立柱網狀結構的多聚體。根據凝膠的交聯程度和含水量的不同，分了軟質、半硬質和硬質三種。軟質凝膠（如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠等）交聯度低，膨脹度大，容量大，可壓宿，不能用於高壓（使用壓力低於3.
5kg/㎝2或更低），主要用於含水體系的常壓凝膠色譜，半硬質凝膠（如苯乙烯一二乙烯基苯交聯共聚凝膠），容量中等，滲透性較高，壓力可用到70kg/㎝2。適用於非水溶劑流動相；硬質凝膠（如多孔矽膠、多也玻球等），膨脹度小，不可壓縮，滲透性好，可耐高壓，適於高流速下操作。
3．流動相
在凝膠色譜中，為提高分率效率，多采用低粘度、與樣品折光指數相差大的流動相。常用的流動相有苯、甲苯、鄰二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。
高效液相色譜使用步驟
4樓：匿名使用者
如何使用高效液相色譜(hplc)
5樓：一個人在那看書
不宵夜，像姆普食用工作是按照**的方式走開，因為每種方式播出什麼樣？
6樓：李春來
開啟色譜，預熱5分鐘，使各項讀數為零，開啟動力氣體，開啟載體。
液相色譜儀使用及工作原理。
7樓：阿儀網
液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而後分析鑑定的儀器。廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。
液相色譜儀工作原理：統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中液相色譜儀的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配係數，在兩相中作相對運動時，經過反覆多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電訊號傳送到記錄儀，資料以圖譜形式列印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和資料處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。
深圳埃科瑞儀器裝置****是一家集研發、設計、生產、銷售、售後為一體的儀器裝置公司，公司gc102af 型氣相色譜儀是完全計算機反控，可以實現遠端儀器檢測和故障診斷的配備氫火焰離子化檢測器（fid）的新一代普及型氣相色譜儀。
什麼是高效液相色譜的速率理論，高效液相色譜 rrt 什麼意思
速率理論 又稱隨機模型理論 1 液相色譜速率方程 1956年荷蘭學者van deemter等人吸收了塔板理論的概念，並把影響塔板高度的動力學因素結合起來，提出了色譜過程的動力學理論 速率理論。它把色譜過程看作一個動態非平衡過程，研究過程中的動力學因素對峰展寬 即柱效 的影響。後來giddings和s...
高效液相色譜實驗，如何確定及優化色譜條件
這個問題很大，不是一句兩句就能解決的，因為一個方法的開發與優化是個系統性的工作，應該不斷的嘗試與改進。就一般情況來說，你想確定合適的液相分析方法，應該首先搞清楚你檢測的物質中都含哪些物質，根據它們的分子式及結構物性，物理化學性質來選擇合適的分析條件。比如是否怕水，有無紫外吸收，分子量大小，極性大小，...
氣相與液相色譜區別，氣相色譜與液相色譜的異同點？
氣相與液相色譜的區別 定義差異 氣相色譜儀，是指用氣體作為流動相的色譜分析儀器 液相色譜儀是指利用混合物在液 固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而後分析鑑定的儀器。分離原理差異 氣相色譜儀是一種物理的分離方法，利用被測試的物質各組分在不同兩相間分配係數的微小差異 高效液相色譜...