1樓:匿名使用者
反相色譜比較正相色譜能夠檢出的物質更多,速度更快,各物質之間的鋒間距更大。
2樓:匿名使用者
本質上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強;反相色譜柱填料極性弱,洗脫順序由強到弱。以下是詳細說明:
1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為矽膠(silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(nh2,aps)和氰基團(cn,cps)的鍵合相填料。
由於矽膠表面的矽羥基(sioh)或其他極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正已烷(hexane),氯仿(chloroform),二氯甲烷(methylene chloride)等。
2、反相色譜 反相色譜用的填料常是以矽膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩衝液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反向填料有:c18(ods)、c8(mos)、c4(butyl)、c6h5(phenyl)等。反相色譜能使中性化合物和極性化合物在一根色譜柱中得到分離.
適用於多種基體中的多類不同性質化合物的測定和分離.
保留時間可以用分子的疏水性進行描述和解釋.
所用高純度的水、甲醇和乙腈等溶劑**便宜、實用.
選擇性可通過用緩衝溶液進行調節(通過調節ph值來調節離子強度和膠團粒子大小等等),以實現最佳分離.
正向高效液相色譜原理?反相高效液相色譜,正相分配色譜,反相分配色譜之間的關係,區別?
3樓:匿名使用者
這問題問的,太不具體了!原理一句兩句說不清,簡單的說:
正相:固定相極版性大於流權動相的極性,比如固定相是矽膠柱,流動相是正己烷;反相正好相反,固定相極性小於流動相的極性,比如固定相是c18柱,流動相是甲醇;原理就是不同物質在流動相和固定相的化學作用力不同保留情況不同,因此把不同物質分開;
何謂正相色譜和反相色譜?在應用上有什麼特點
4樓:雨說情感
1、正相色譜基本上可以被看做是液固吸附色譜,其柱填料是吸附劑,其表面上分佈有活性吸附位點,溶劑和溶質分子均能被吸附於活性位點上。由於相互作用力有大有小,溶劑分子與溶質分子、溶質分子相互之間又存在競爭吸附,從而造成了在柱內保留時間的差異,使不同物質得到分離。
應用特點:正相色譜一般用來分離中性化合物和離子(或可電離的)化合物,而且以中性樣品為主。適於分離樣品如下:
①對於反相色譜法很難分離的異構體,可以採用以矽膠為固定相的正相色譜分離分析;
②根據被分離樣品極性差別進行族類分離;
③易於水解樣品的分離分析;
④分離分析高脂溶性樣品,其在極性有機溶劑中溶解度很小;
⑤正相色譜也可以用於異構體分離(包括幾何異構體和光學異構體)。
2、流動相極性大於固定相極性的情況,稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現代液相色譜中應用最廣泛,現代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
反相介質效能穩定。分離效率高,可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸等含有非極性基團的各種物質。
應用特點:反相介質效能穩定。分離效率高,可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物鹼等含有非極性基團的各種物質。
擴充套件資料
原理:反相色譜(rpc)是指利用非極性的反相介質為固定相,極性有機溶劑的水溶液為流動相,根據溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。
與hic一樣,rpc中溶質也通過疏水性相互作用分配於固定相表面,但是,rpc固定相表面完全被非極性基團所覆蓋,表現出強烈的疏水性。因此,必須用極性有機溶劑(如甲醇、乙腈等)或其水溶液進行溶質的洗脫分離。
溶質在反相介質上的分配係數取決於溶質的疏水性,一般疏水性越大,分配係數越大。當固定相一定時,可以通過調節流動相的組成調整溶質的分配係數。
rpc主要應用於相對分子質量低於5000,特別是1000以下的非極性小分子物質的分析和純化,也可以用於蛋白質等生物大分子的分析和純化。
由於反相介質表面為強烈疏水性,並且流動相為低極性的有機溶劑,生物活性大分子在rpc分離過程中容易變性失活,所以,以**生物活性蛋白質為目的時,應注意選用適宜的反相介質。
5樓:
根據流動相極性的強弱來區分。
反相還是正相,是根據流動相相對於固定相的極性而言的。流動相極性強於固定相的,稱作反相色譜,流動相極性弱於固定相的,稱作正相色譜。
反相色譜流動相的極性強,容易帶著極性分子走,而留下非極性分子。這主要用於非極性樣品的分離,常用的高壓液相色譜都是這種。也有人喜歡說反相液相色譜,其實是一個意思。
就是顯得博學一點。
反相色譜主要是以水等極性物質作為流動相,按相似相容原理,出峰先後是從極性強的到極性弱的,而正相色譜的流動相大多為非極性物質。出峰先後則是從弱極性的到強極性的。
最直觀的是看固定相和流動相的極性差異,另外也要看你想要實現拆分的物質極性與固定相和流動相的極性差異。在忽略掉空間結構的前提下,主要依靠極性大小導致相互作用能差,進而實現有效拆分。
什麼是正相色譜和反相色譜
6樓:枚樂悅
正相色譜基本上可以被看做是液固吸附色譜,其柱填料是吸附劑,其表面上分佈有活性吸附位點,溶劑和溶質分子均能被吸附於活性位點上。由於相互作用力有大有小,溶劑分子與溶質分子、溶質分子相互之間又存在競爭吸附,從而造成了在柱內保留時間的差異,使不同物質得到分離。
流動相極性大於固定相極性的情況,稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現代液相色譜中應用最廣泛,現代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
反相介質效能穩定。分離效率高,可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸等含有非極性基團的各種物質。
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在正相色譜中,樣品分子與載體基質的矽醇基團發生特異的極性相互作用,與固定相產生強極性相互作用的極性樣品分子比較難被洗脫,在柱內停留比較長的時間,反之,極性較弱或非極性分子與矽膠之間產生相對較弱的相互作用,比較容易被洗脫,因而在柱內停留的時間較短。
正相色譜的保留機理類似於吸附過程。極性樣品分子和溶劑分子吸附在柱填料表面的極性基團上。對於正相中經常選用的氰基、氨基或二醇基固定相柱,吸附位點通常為鍵合相配體或矽烷醇。
7樓:加油奮鬥再加油
反相與正相的區別在於,固定相與流動相的極性大小。
反相:固定相的極性小於流動相的極性
正相:固定相的極性大於流動相的極性
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