蛋白質等電點的測算方法,蛋白質等電點測定實驗的原理是什麼

時間 2021-08-13 16:24:16

1樓:學子莘

等電點:如果調節溶液的ph值使得其中的氨基酸呈電中性,我們把這個ph值稱為氨基酸的等電點:pi。

pi是氨基酸的重要常數之一,它的意義在於,物質在pi處的溶解度最小,是分離純化物質的重要手段。等電點的計算:對於所有的r基團不解離的氨基酸而言(即解離只發生在α-羧基和α-氨基上),計算起來非常簡單:

pi=(pk1』+pk2』)/2若是碰到r基團也解離的,氨基酸就有了多級解離,這個公式就不好用了,比如lys、glu、cys等。aa cys asp glu lys his argpk』α-羧基 1.71 2.

69 2.19 2.18 1.

82 2.19pk』α-氨基 8.33 9.

82 9.67 8.95 9.

17 9.04pk』-r-基團 10.78(-sh) 3.

86(β-cooh) 4.25(γ- cooh) 10.53(ε-nh2) 6(咪唑基) 12.

48(胍基)在這種情況下可以按下面的步驟來計算:<1> 由pk』值判斷解離順序,總是pk1』< pk2』< pk3』< …,即誰的pk』值小,誰就先解離。<2> 按照解離順序正確寫出解離方程式:

簡式,注意解離基團的正確寫法。<3> 找出呈電中性的物質,其左右pk』值的平均值就是氨基酸的等電點:pi=(pk左』+pk右』)/2以lys為例:

在黑板上用簡式演示<3>

等電點的測定:等電聚焦法:這是一種特殊的電泳,其載體上鋪有連續的ph梯度的緩衝液,然後將氨基酸點樣,只要該處的ph與氨基酸的pi不同,則氨基酸就會帶電,ph值》pi時,aa帶-電;ph值

通電後,氨基酸就會移動,直到某處的ph=pi,氨基酸才呈電中性,不再移動,因此,可以測出pi。

等電點沉澱

所有的氨基酸均為兩性物質,亦即它們至少含有一個酸性基(carboxyl)及一個鹼性基(α-amino)。這些可遊離的團基在ph變化時,因釋出或接受質子而可充當弱酸或弱鹼,其離子化特性與其它物質一樣遵守henderson-hasselbalch方程式:

ph = pka + log10 [未質子化的形式(鹼)] / [已質子化的形式(酸)]

即ph = pka + log [a-] / [ha]

氨基酸可以三種形式存在,即正電荷(cation)、兩性離子(zwitterion)或雙極性離子(dipolar ion)及負電荷(anion)等三種,若在酸性溶液中帶正電荷,則在鹼性溶液中帶負電荷。若氨基酸在某一ph值下其淨電荷為0,且在電場中不移動時,稱此ph值為它的pi值(等電點)。因為淨電荷為零,淨電斥力不存在的緣故,大部份蛋白質於等電點的ph值下,其溶解度最小。

相反的,當溶液的ph值低於或高於pi,所有蛋白質分子所帶淨電荷必為同號,彼此之間有相斥力,不會凝結。所以,將ph調到等電點的大小,則大部份的蛋白質將會沉澱,這種現象可以應用於估算某蛋白質的等電點.

2樓:cofe_飛

不知道蛋白序列的話,,可以先用質譜分析蛋白的序列,然後再用上面的工具去算蛋白的等電點

蛋白質等電點測定實驗的原理是什麼

蛋白質等電點的測定方法

3樓:終極至尊

●方法:平板等電聚焦

●原理:蛋白質分子在含有載體兩性電介質形成的連續而穩定的線性ph梯度中進行電泳。但不自是按照等電點不同被分離。

●儀器:bio-rad model 111mini ief cell●樣品要求:

●液體:濃度》3mg/ml;體積》200ul;固體:質量》200ug●樣品純度》90%;含鹽量<3 0mm;分子量:一般要求大於1000da

●常見影響測試情況:

1、蛋白質純度不足

2、含鹽量過高

3、蛋白質分子量太小,導致無法固定染色

蛋白質等電點時有什麼性質,蛋白質等電點

一零啞劇 蛋白質在溶液中有兩性電離現象。假設某一溶液中含有一種蛋白質。當pi ph時該蛋白質極性基團解離的正負離子數相等,淨電荷為0,此時的該溶液的是ph值是該蛋白質的pi值。某一蛋白質的pi大小是特定的,與該蛋白質結構有關,而與環境ph無關。在某一ph溶液中當ph pi時該蛋白質帶負電荷,反之ph...

蛋白質等電點測定實驗現象,蛋白質等電點的測定方法

凌誠出溪 1,在等電點附近,蛋白質溶液開始變渾濁,離心可見沉澱 2,遠離等電點,蛋白質溶液開始變澄清,離心未見沉澱 生物化學實驗 蛋白質的兩性反應和等電點測定 以下3個問題急求答案 求求各位大俠相助啊! 1.當蛋白質溶來液處於某一ph時,源蛋白質解離bai成正 負離子的趨勢du相等,即成為兼zhi ...

蛋白質等電點和氨基酸等電點的關係

兩者之間沒有直接的關係。氨基酸的等電點由 nh3 cooh及r基上的易解離基團決定,當一個氨基酸只存在 nh3 cooh,pi為這兩個基團pka值的平均值。存在3個可解離基團時,pi為2個同屬性基團pka值的平均值,如酸性氨基酸的pi就等於 cooh及r基上 cooh pka值的平均值。由於 coo...