透析後的蛋白質濃度和鹽析後相比為什麼會降低

時間 2021-08-30 10:34:36

1樓:匿名使用者

這是兩種不同的概念。

鹽析:向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液後,可以使蛋白質凝聚而從溶液中析出。

既然是析出,就意味著蛋白區域性濃度增大,最終形成不溶物。離心收穫蛋白,可根據自己的需要將蛋白重新溶解,進而得到不同濃度的蛋白溶液。

透析(dialysis):是通過小分子經過半透膜擴散到水(或緩衝液)的原理,將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術。蛋白置於透析袋內,在透析過程,小分子鹽類透出,同時因為鹽濃度差,透析袋外側的水滲入透析袋,所以袋內的蛋白被不斷稀釋,但最終會達到平衡。

所以,兩者的蛋白濃度出現差異。

2樓:中城寨

透析是小分子出去,蛋白等大分子留下,小分子出去的同時水進透析袋了啊,蛋白質濃度就變低了,鹽析就是加鹽使蛋白質沉澱,照理說溶液中蛋白質濃度也變低的啊

3樓:

鹽析之後需要通過透析或者脫鹽柱的方法去除鹽離子,才能更好的用於進一步的分離純化和功能鑑定。透析採用的是半透膜,分子篩的方法,在透析的過程中,鹽離子會自由擴散到整個溶液中,而蛋白被截留,不斷的更換溶液,而鹽離子越來越少。但是由於水分子也會自由擴散,因此,透析袋中的水就會越來越多,因此蛋白質濃度逐漸降低,所以一般透析之後,還有一個濃縮的過程。

因此,現在n多公司開發了各種膜系統,例如脫鹽柱,濃縮柱等等,而且透析袋也做得非常好,有一種透析卡就很方便。

蛋白質純化過程中為什麼鹽析後還要進行透析

4樓:匿名使用者

蛋白質分離提純的一般原則 1. 前處理把蛋白質從原來的組織或溶解狀態釋放出來,保持原來的天然狀態,並不丟失生物活性。常用的方法:

勻漿器破碎、超生波破碎、纖維素酶處理以及溶菌酶等。超聲波破碎法:當聲波達到一定頻率時,使液體產生空穴效應使細胞破碎的技術。

超聲波引起的快速振動使液體區域性產生低氣壓,這個低氣壓使液體轉化為氣體,即形成很多小氣泡。由於區域性壓力的轉換,壓力重新升高,氣泡崩潰。崩潰的氣泡產生一個振動波並傳送到液體中,形成剪下力使細胞破碎。

2. 粗分級分離可用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大, 3. 細分級樣品的進一步純化。樣品經粗分離以後,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去。

進一步純化,一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳、等電聚焦等作為最後的純化步驟。結晶是最後的一步分離純化的方法:

1.分子大小;2.溶解度;3.電荷;4.

吸附性質;5.對配體分子的生物親和力等。 (一)根據分子大小不同的純化方法 1.

透析 利用蛋白質分子不能通過半透膜,使蛋白質和其它小分子物質如無機鹽、單糖等分開。 2. 密度梯度離心。

蛋白質顆粒的沉降係數不僅決定於它的大小,而且也取決於它的密度。 3. 凝膠過濾利用蛋白質分子大小,因為凝膠過濾所用的介質是凝膠珠,其內部是多孔的網狀結構。

當不同的分子大小的蛋白質分子流過凝膠層析柱時,比凝膠珠孔徑大的分子進入珠內的網狀結構,而被排阻在凝膠珠之外隨溶劑在凝膠珠之間的空隙向下移動並最先流出柱外,比網孔小的分子能不同程度底自由出入凝膠珠的內外,由於不同大小的分子所經路徑不同而得到分離。大分子先被洗脫下來。小分子後被洗脫 (二)利用溶解度差別的純化方法 1.等電點沉澱和ph的控制蛋白質處於等電點時,其淨電荷為零,由於相鄰蛋白質分子之間沒有靜電斥力而聚集沉澱。

因此在其他條件相同時,它的溶解度達到最底點,利用等電點分離蛋白質是一種常用的方法。 2. 蛋白質的鹽溶和鹽析中性鹽可以增加蛋白質的溶解度,這種現象稱為鹽溶。

鹽溶作用是由於蛋白質分子吸附某種鹽類離子後,帶電層使蛋白質分子彼此排斥,而蛋白質分子與水相互作用加強了,因而溶解度增加當溶液的離子強度增加到一定數值時,蛋白質的溶解度開始下降。當離子強度足夠高時,很多蛋白質可以從水溶液中沉澱出來,這種現象稱為鹽析。鹽析作用的主要原因是大量中性鹽的加入使水的活性降低,原來溶液的大部分甚至全部的自由基水轉變成鹽離子的水化水

提純蛋白質時鹽析法與有機溶劑法的優缺點

5樓:留遐思侍醜

鹽析是加入了濃的可溶性鹽溶液,下降了蛋白質的溶解度而使蛋白質析出,屬於物理程序。有機溶劑、重金屬離子是使蛋白質變性,喪失其生理活性。鹽析的蛋白質加水可溶解,而變性後的蛋白質不會恢復。

6樓:韓小飛

1、鹽析法 優點是鹽析法簡單方便,可用於蛋白質抗原的粗提、丙種球蛋白的提取、蛋白質的濃縮等。缺點是鹽析法提純的抗原濃度不高,只用於抗原的初步純化。

2、有機溶劑沉澱法

優點是是分辨能力比鹽析法高,溶劑容易除去且可**,沉澱的蛋白質不需要脫鹽處理,缺點是有機溶劑易使蛋白質或酶變性,常採用降低溫度的方法進行有效控制,而且有機溶劑使用量大,溶劑的使用及**;儲存都比較困難或麻煩。

7樓:恨海狂人梅文俊

從細胞中提取出來的生物大分子是不純淨的,必須進一步分離純化才能獲得純品。在生物大分子製備工作中,分離純化是比較複雜和重要的一個環節。

對於異類的物質,如提純蛋白質和酶時混雜著核酸,提純核酸時混雜著蛋白質或多糖,一般可用專一性酶水解、有機溶劑抽提、選擇性分部沉澱等方法處理,小分子物質常在整個製備過程中多次液相與固相互相轉化被分離或最後用透析方法除去。

而對同類物質,如酶和雜蛋白,rna和dna以及不同結構的蛋白質、酶、核酸之間的分離,情況則複雜得多,主要應用的方法有鹽析法、有機溶劑沉澱法、等電點沉澱法、吸附法、結晶法、電泳法、超速離心法、柱層析法等。其中鹽析法、等電點法、結晶法用於蛋白、酶的提純較多;有機溶劑抽提和沉澱用於核酸提純較多;柱層析法、梯度離心法在蛋白質和核酸的提純工作中應用均十分廣泛。

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